Изоляция аорты свиней: хирургическая процедура по удалению грудной аорты у миниатюрных свиней для последующего анализа

Аннотация

Источник: Zhao, Y., et al. Выделение и культивирование первичных эндотелиальных клеток аорты у миниатюрных свиней J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео мы демонстрируем процедуру хирургического удаления аорты у миниатюрных свиней. Эндотелиальные клетки, собранные из этих изолированных аорт, могут быть дополнительно культивированы in vitro для изучения коагуляции и иммунных реакций.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Хирургия и подготовка к выделению эндотелиальных клеток аорты свиньи

1. Дезинфекция операционной ультрафиолетовым излучением в течение 1 ч и медицинской дезинфицирующей жидкостью 84 (доступное содержание хлора 4,0% - 5,0%, Таблица материалов) перед проведением операции.
2. После того, как миниатюрная свинья получила внутримышечную инъекцию, состоящую из 15 мг/кг кетамина, 15 мг/кг ксилазина гидрохлорида и 0,05 мг/кг фенацетина гидрохлорида (Объемы: 100 мкл/кг, Таблица материалов) (Рисунок 1А), подтвердите наркозный статус животного с проверкой болезненного раздражителя свиньи (например, защемление одного уха или тряска одной передней конечности) и физиологический индекс (например, артериальное давление, частота сердечных сокращений и дыхания).
   заметка: Еще одна инъекция половинной дозы может быть сделана свинье, если у нее появятся признаки пробуждения.
3. Разрежьте брюшную полость скальпелем, обнажите нижнюю полую вену и затем введите гепарин натрия (5000 ЕД, Таблица материалов) в нижнюю полую вену с помощью шприца объемом 5 мл.
4. Через пять минут вставьте катетер в брюшную аорту до крови, разрежьте кожу грудной клетки и надрежьте диафрагму скальпелем, а затем отрежьте левый желудочек><. заметка: Убедитесь, что свинья усыплена, проверив пульс аорты после кровопускания и разрезания сердца.
5. Иссеките ребра костными щипцами (Таблица материалов) и обнажите сердце и легкие. Найдите аорту, расположенную позади сердца и легких, и зажмите два конца. Промойте аорту один раз с помощью предварительно охлажденного промывочного буфера - 1x раствор PBS (pH 7,4) с 1% (v/v) пенициллин/стрептомицин. (Рисунок 1B,C).
6. Вырежьте аорту ножницами и держите аорту зажатой с каждого конца. Иссекайте излишки ткани вокруг аорты с помощью стерильных щипцов и ножниц. Поместите аорту в центрифужную пробирку объемом 50 мл, промойте аорту предварительно охлажденным промывочным буфером 3x (30 мл на промывку) и перенесите аорту в лабораторию (рис. 1D).

Результаты

Рисунок 1: Хирургическая процедура и иссечение аорты у миниатюрной свиньи. (А) Фотография миниатюрной свиньи (Бама). (B) Аорта обнажается после лапаротомии и торакотомии. (C) Аорта зажимается с каждого конца. (D) Аорта помещается в пробирку объемом 50 мл с буфером для холодной промывки.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
20 x раствор PBS (pH 7,4, без нуклеаз)	Сангон Биотех	B540627#
75% Медицинский спирт	Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd. Китай
Костные щипцы	Beijing HeLi KeChuang Technology Development CO., Ltd. Китай	HL-YGQ
BOON Одноразовый шприц (10 мл)	Jiangsu Yile medical Article Co., Ltd. Китай
Инъекция сложного кетамина	Ветеринарная фармацевтическая фабрика в Шэньяне, Китай		Кетамина гидрохлорид: 0,3 г / 2 мл, ксилазина гидрохлорид: 0,3 г / 2 мл, фенацетина гидрохлорид: 1 мг / 2 мл
щипцы	ShangHai medical instruments Co., Ltd. Китай
Гепарин натрия	Jiangsu WanBang biopharmaceutical Co., Ltd. Китай
Йодная настойка	Guilin LiFeng Medical Supplies Co., Ltd. Китай
Миниатюрная свинья (Бама или Учжишань)	Kang Yi Ecological Agriculture Co., Ltd, Китай
Пенициллин/стрептомицин	Технологии Life	15070063#
ножницы	ShangHai medical instruments Co., Ltd. Китай
Хирургический скальпель	ShangHai medical instruments Co., Ltd. Китай	22#