Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Подготовка кролика к операции
- Обезболите кролика с помощью 20–40 мг/кг кетамина и 2 мг/кг мидазолама путем подкожной инъекции. Поместите кролику 1,5–3% изофлуран (обычно 2%) на протяжении всей первоначальной седации, используя маску. Сделайте инъекцию алфаксона для поддержания анестезии с помощью внутримышечной инъекции 3 мг/кг.
- После обезболивания снимите маску и вставьте эндотрахеальную трубку с манжетой в дыхательные пути и подключите к аппарату искусственной вентиляции легких. Продолжайте принимать изофлуран в концентрации 1,5–3%.
- Соберите кровь из центральной артерии из любого уха для базовой биохимической панели.
- Поместите катетер в ушную вену 22 г в боковую ушную вену для капельного введения раствора Лактата Рингера на протяжении всей хирургической процедуры. В качестве альтернативы можно использовать обычный физиологический раствор (0,9% хлорида натрия).
- Используя боковую вену в противоположном ухе, поместите катетер в вену и введите альфаксолон в дозе 6 мг/кг/ч. Постепенно увеличивайте дозу алфаксолона до 8 мг/кг/ч, снижая изофлуран до 0,6% в течение подготовительного периода.
- Чтобы уменьшить боль и риск инфекции, вводите бупренорфин (0,01 мг/кг) и энрофлоксацин (5 мг/кг) с помощью подкожной инъекции иглой 25 G.
- Подстригите волосы на шее, правой и левой внутренней стороне бедер и сзади с помощью машинки для стрижки (лезвие #40). Шерсть удаляется с тыльной стороны для поддержания контакта с заземляющей подушкой.
- Наденьте манжету для измерения артериального давления на каждую из задних конечностей и измерьте начальное артериальное давление. Поместите манжету чуть ниже колена, а щуп чуть выше скакательного сустава на боковой поверхности.
- Положите кролика на операционный стол на спину и потрите и накиньте накидку на места операции. Это включает в себя шейку для доступа к сонной артерии и внутреннюю правую поверхность бедра для доступа к бедренной артерии. Проведите стерилизационный скраб чередуя скрабы 2% хлоргексидина и 70% этилового спирта. Повторите это три раза, затем нанесите заключительное распыление 2% раствором хлоргексидина.
- Поместите стерилизованный шарик из нержавеющей стали толщиной 3 мм в полиэтиленовый мешок низкой плотности поверх правой (вычищенной) ноги в верхней части бедра, чтобы он служил ориентиром по размеру во время измерений ангиограммы. Наложите стерильную простыню на ногу до момента операции. Оставьте шарик внутри стерильного полиэтиленового пакета во время первой ангиограммы.
2. Ангиография
- Обнажить правую общую сонную артерию
- Сделайте разрез длиной 4–5 см сбоку от трахеи с помощью скальпеля с лезвием #15.
- Используйте тупое рассечение, чтобы обнажить сонную артерию и открыть разрез с помощью небольших ретракторов Вейтланера. Осторожно изолируйте сонную артерию от яремной вены и блуждающего нерва. Как правило, для тупого вскрытия используются изогнутые ножницы Метценбаума и изогнутый комариный гемостат. Обязательно нужно добиться полного отделения сонной артерии от нерва и яремной вены, чтобы лигатуры перевязывали только артерию.
- Наложите лигатуру с помощью шелкового шва 4-0 на проксимальный и дистальный концы обнаженной артерии. Перевяжите дистальный конец сонной артерии хирургическим узлом, за которым следуют четыре квадратных узла. На проксимальном конце используйте петлю лиги, чтобы ее можно было затягивать или ослаблять по мере необходимости. Использование лигалупа, размещенного на проксимальном конце обнаженной артерии, может помочь закрепить интродьюсер и катетер.
- Вводите 500 МЕ гепарина через внутривенное введение. Используйте примерно 0,5 мл 1% лидокаина, наносимого вдоль обнаженной сонной артерии, для расширения сосуда. Обычно достаточно одной процедуры, но при необходимости ее можно повторять. Разрежьте примерно посередине сонной артерии с помощью скальпеля или ножниц по радужной оболочке, затем поместите 4-дюймовый инструмент для введения проволоки в артерию.
- Проведите проводниковую проволоку размером 0,014 дюйма x 185 см через инструмент для введения к бифуркации аорты на гребне подвздошной кости в нисходящей аорте. Извлеките инструмент для введения и вставьте ангиографический катетер 3F pigtail через проволоку.
- Продвинуте катетер с косичкой на 2 см проксимальнее бифуркации аорты на гребне подвздошной кости в нисходящей аорте.
- Расположите кончик катетера между седьмым поясничным и первым крестцовым позвонками. Проверьте расположение катетера, вручную введя 2–4 мл контрастного вещества.
- Введите внутриартериальную инъекцию 100 мкг нитроглицерина через катетер для увеличения вазодилатации.
- Введите 0,8 мл 1% лидокаина кролику через катетер, чтобы помочь с вазодилатацией во время ангиограммы. Прикрепите трубку для инжектора к катетеру и удалите все пузырьки воздуха в магистрали. Введите 8-9 мл контрастного вещества с помощью автоматизированного ангиографического инжектора через катетер.
- Записывайте серийные изображения задних конечностей с помощью ангиографии.
- Установите инжектор питания на ввод контраста со скоростью 3 мл/с, что в сумме составит 8-9 мл. Выполняйте цифровую субтракционную ангиографию с частотой 6 кадров в секунду.
- Выберите серийные изображения и измените фотографию каждой ангиограммы, установив приблизительно -40%, чтобы свести к минимуму появление кости и получить полную картину перфузии сосуда с контрастом. Пример ангиограммы сосудистого кровотока после перевязки/иссечения бедренной артерии показан на рисунке 1.
