Создание кроличьей модели костной инфекции: техника индуцирования хронической инфекции путем введения бактерий непосредственно в костный мозг

Аннотация

Источник: Zhang, Y et al., Лечение сульфатом кальция, загруженным ванкомицином, и аутогенной костью в улучшенной модели костной инфекции у кроликов. J. Vis. Exp. (2019).

В этом видео описана техника хирургического индуцирования бактериальной инфекции в костном мозге кролика с использованием костного воска, чтобы избежать утечки бактерий. Эта модель кролика может быть использована для изучения лечения костной инфекции и регенерации костей.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Подготовка моделей костной инфекции

1. Содержать самцов новозеландских белых кроликов в возрасте 3 месяцев в индивидуальных клетках, в условиях контролируемого воздуха (20 ± 1 °C) и 12 ч/12 ч светлых и темных циклов освещения. Предлагайте регулярное питание и ежедневную воду из-под крана.
2. Следите за тем, чтобы на момент операции кролик весил более 3 кг.
3. Обезболивание кроликов путем внутрибрюшинного введения пентобарбитала натрия (3 мг на 100 г массы тела). Убедитесь, что кролики полностью обезболены из-за отсутствия реакции на щипок лапы. Закрепите кроликов на операционном столе во время процедуры.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что продолжительность процедуры моделирования не превышает 1 часа.
4. Брейте проксимальную область большеберцовой кости с помощью электробритвы против направления роста волос. Продезинфицируйте кожу, применив раствор повидон-йода.
5. Отметьте ручкой и линейкой верхний конец большеберцовой кости и место сверления отверстия для инъекции S. aureus (расстояние до верхнего конца большеберцовой кости 1,5 см). Убедитесь, что отверстия для сверления отверстий находятся в середине плато большеберцовой кости горизонтально (рисунок 1A).
6. Разрежьте кожу голени с помощью скальпеля No 11 и сделайте надрез 1 см в надкостнице (рисунок 1Б, В). Проделайте отверстие диаметром 2 мм в большеберцовой кости с помощью электрического сверла для кости (Рисунок 1D).
7. Прижмите отверстия диаметром 2 мм в плато большеберцовой кости цилиндром из костного воска диаметром 2 мм и высотой 2 мм (рисунок 1E). Удалите запасной костный воск вдоль горизонтальной плоскости плато большеберцовой кости (рисунок 1F). Убедитесь, что отверстие диаметром 2 мм заполнено костным воском (Рисунок 1G).
   заметка: Убедитесь, что отверстия заполнены костным воском, проверив отверстие с кровью или без него.
8. Зашейте надкостницу и кожу рассасывающимся хирургическим швом в вертикальный шов матраса, чтобы животное не сгрызло швы (Рисунок 1H).
9. Введите 1 x 10⁸ КОЕ/мл растворов S. aureus (30 мкл на 100 г массы тела) с помощью асептического инжектора 1 мл (рис. 1I). Убедитесь, что иглы проникают в костный воск, и медленно вводите раствор S. aureus в костный мозг.
10. Держите животное в теплых и чистых условиях, чтобы избежать потери тепла после моделирования. Следите за частотой дыхания и сердцебиения. После пробуждения размещайте кроликов в индивидуальных клетках со свободным доступом к еде и воде.

Результаты

Рисунок 1. Хирургическая подготовка модели костной инфекции.(A) Показывает положение пробивки на большеберцовой кости. Расстояние между положением отверстия для инъекции S. aureus и верхним концом большеберцовой кости составляет 1,5 см. (В) Разрез делается на коже для обнажения надкостницы. (C) Показывает разрез, сделанный через надкостницу ...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
рассасывающийся хирургический шовный материал	Цзинхуань	18С0604А
Инжектор асептики	Цзинлун	20170501
костный воск	ETHICON	JH5CQLM
Электрическая дрель для кости	Бао Кан	БКЗ-1
Электробритвы	Кодос	3800
Новозеландские белые кролики	Чжэцзянский центр экспериментальных животных	СКХК 2014-0047
Скальпель No 11	Юаньликан	20170604
пентобарбитал натрия	Мерк	2070124
S. aureus порошок для сублимационной сушки	Китайский центр общего сбора микробиологических культур	АТКС 6538