Размораживание эмбрионов кроликов: процедура согревания для восстановления криоконсервированных эмбрионов кроликов для переноса эмбрионов

Аннотация

Источник: Гарсия-Домингес, X. и др., Минимально инвазивный перенос эмбрионов и витрификация эмбрионов на оптимальной стадии эмбриона в модели кролика. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует процедуру размораживания витрифицированных эмбрионов кроликов и шаги по мерам предосторожности для оптимального восстановления эмбрионов.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Прогревание эмбриона

1. Разморозьте эмбрионы за один этап.
   1. Расположите мини-соломинку горизонтально на расстоянии 10 см от паров жидкого азота на 20-30 с.
   2. Когда внутри министроу начнется процесс кристаллизации, погрузите министрогу в водяную баню при температуре 25°C на 10-15 с.
   3. Снимите заглушку из мини-трубочки и отрежьте ватную пробку.
   4. С помощью спаренного микродозатора выдавите все содержимое министроуза в тарелку, содержащую 0,33 М раствор сахарозы при температуре 25°C в BM на 5 минут.
      заметка: Этот шаг должен быть выполнен быстро, чтобы уменьшить воздействие раствора для витрификации на эмбрион
   .
   5. Переместите эмбрионы в новую тарелку, содержащую раствор БМ, еще на 5 минут.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Жидкий азот	Эр Ликид	P1505XXX
Чашки Петри, 35 мм	Сигма Олдрич	CLS430165-500 шт.
Пластиковая повязка (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Пластиковая соломинка 0,25 мл	IMV - технологии	Номер 6431
ножницы	РОБОЗ	РС-5880	Подойдут любые обычные маленькие прямые ножницы из хирургической стали.
Стерильные перчатки	Alvet Escartí	087ГЛ010075
Стерильный халат	Alvet Escartí	12261501
Стерильная маска	Alvet Escartí	058В15924Б
Заглушка для соломинки	IMV - технологии	Номер 6431
сахароза	Сигма Олдрич	С7903
Водяная баня	РАЙПА	БАЕ-4
Фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS)	Сигма Олдрич	Д5773	Без хлорида кальция.