Методическая статья

Перенос эмбрионов кролику: процедура переноса эмбрионов в яйцевод модели кролика-реципиента при овуляции

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Гарсия-Домингес, X. и др., Минимально инвазивный перенос эмбрионов и витрификация эмбрионов на оптимальной стадии эмбриона в модели кролика. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео описывает технику переноса эмбрионов в яйцевод самки кролика-реципиента с помощью лапароскопии. Он позволяет ремоделировать эмбрион у кроликов во время его миграции по яйцеводу, что в конечном итоге способствует успешной имплантации. Этот метод также может быть использован для хранящихся эмбрионов с хорошей эффективностью.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Перенос эмбрионов

  1. Подготовка реципиентных самок
    1. Используйте только половозрелых самок (> возрасте 4,5 месяцев).
    2. За неделю до ЭТ адаптируйте самок к 16-часовому световому/8-часовому темновому режиму, чтобы инициировать рост фолликулов и повысить восприимчивость самок.
    3. Выбирайте реципиентных самок, наблюдая за упругостью и цветом вульвы. Если вульва опушенная и красноватая, самка восприимчива.
    4. Вызвать ложную беременность (овуляцию) однократным внутримышечным введением 1 мкг бусерелина ацетата (синтетический аналог гонадотропин-рилизинг-гормона) независимо от массы тела.
      Примечание: В норме 0,8 г является подходящей дозой для индукции овуляции у кроликов среднего размера (4-5 кг), поэтому 1 г обычно гарантирует овуляцию.
    5. Вызывайте овуляцию за столько дней до переноса, сколько возраст эмбрионов, подлежащих переносу (например, за 70-72 ч до свежей морулы ET).
  2. Анестезия и анальгезия
    1. Взвесьте кролика и загрузите следующие анестетики и анальгетики.
      1. В шприц объемом 1 мл с иглой 30G: загрузить ксилазин (5 мг/кг) и бупренорфина гидрохлорид (0,03 мг/кг). В другой шприц объемом 1 мл с перикраниальной иглой 23G загрузите кетамина гидрохлорид (35 мг/кг).
    2. Подержите кролика и введите смесь ксилазин-бупренорфина внутримышечно.
    3. Введите перикраниальную иглу с кетамином в краевую ушную вену, медленно вводя все содержимое шприца внутривенно.
    4. Зафиксируйте иглу и оставьте ее вставленной на протяжении оставшихся этапов, чтобы при необходимости ввести больше анестезии.
    5. Оставьте кролика в клетке (чистой и без каких-либо других животных) на теплой сцене.
    6. Когда вы потеряете сознание, нанесите глазную мазь, чтобы избежать сухости глаза><, и проверьте отсутствие пальпебрального флекса. заметка: Этот протокол предусматривает хирургическую плоскость анестезии в течение минимум 30 минут. Если требуется более длительное время, введите дополнительные дозы с половиной количества кетамина гидрохлорида, описанного в 1.2.1, через 30 мин.
    7. Следите за глубиной анестезии, проверяя рефлекс педали и дыхательные движения. Изменения в ритме дыхания в сторону нерегулярного и более быстрого темпа указывают на потерю надлежащей плоскости анестезии.
    8. Следите за цветом слизистых оболочек (глаз, губ и т.д.), частотой дыхания (30-60 вдохов в минуту), частотой сердечных сокращений (120-325 ударов в минуту) и ректальной температурой (38-39,6 °C).
    9. За восемь часов до перевода не давайте пищу животным, чтобы избежать увеличения размера и активности кишечника до тех пор, пока процесс ЭТ не будет завершен. Оставьте свободный доступ к воде.
  3. Подготовка эмбрионов
    1. Нагрейте среду для манипуляций с эмбрионами до 25 °C: Базовая среда (БМ), состоящая из фосфатно-солевого буфера Дульбекко (DPBS) с добавлением 0,2% (w/v) бычьего сывороточного альбумина.
    2. Работая под стереомикроскопом, промыть свежие или размороженные (Шаг 2) эмбрионы с помощью БМ.
    3. Используя стерильные перчатки, прикрепите правильно настроенный эпидуральный катетер 17G к шприцу объемом 1 мл.
    4. Внесите 1 см БМ в катетер, а затем небольшой пузырь воздуха.
    5. Аспирировать 5-7 эмбрионов в объеме 10 мкл БМ, после чего следует еще один небольшой пузырь воздуха.
    6. Завершите нагрузку катетера путем аспирации 1 см БМ.
  4. Перенос эмбрионов
    1. Рассмотрите возможность использования стерильных перчаток, халата и маски для обеспечения асептической среды.
    2. Простерилизуйте хирургические инструменты, очистите поверхности, на которых будет проводиться операция, и протрите их 70% этанолом.
    3. Выполните анестезию, как описано ранее (шаг 1.2), проверяя потерю рефлексов.
    4. Сбрейте шерсть с брюшной полости электрической бритвой.
    5. Подготовьте брюшную полость асептически.
      1. Очистите операционную область и удалите оставшиеся волосы. Промойте операционную область мылом с хлоргексидином глюконатом. Продезинфицируйте участок раствором хлоргексидина и этанолом 96º (3 раза).
    6. Поместите животное на теплый хирургический стол в положении Тренделенбурга (голова вниз под углом 45°), чтобы желудок и кишечник располагались черепно. Рассмотрите возможность опорожнения мочевого пузыря, если он вздут. Если в процессе будут повреждены какие-либо внутренности, животное может умереть. Поэтому важно, чтобы они были правильно расположены (Рисунок 1).
    7. Накройте эту область стерильным полотенцем с отверстием (фенестрацией), открывающим выбритый участок, чтобы отделить место операции от любых потенциальных загрязненных участков.
    8. Ввести один эндоскопический троакар на 5 см в брюшную полость, на 2 см каудально к мечевидному отростку, и инсуффировать через него брюшную полость с помощью регулирующего давление механического инсуффлятора.
      заметка: Внутрибрюшное давление должно составлять 8-12 мм рт.ст. сСО2 (рис. 1А).
    9. Вставьте камеру эндоскопа через эндоскопический троакар (рис. 1B).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Определите репродуктивный тракт, определив статус и положение инфундибулума и ампулы до ЭТ, чтобы облегчить следующие шаги.
    10. Введите эпидуральную иглу 17-G в паховую область на расстоянии 2-3 см от инфундибулума (рис. 1B).
    11. Определите вход инфундибулума (рисунок 2А, 2В).
    12. Введите нагруженный катетер (шаг 1.3) через эпидуральную иглу в брюшную полость (рисунок 1C).
    13. Найдите яйцевод и введите 1-2 см эпидурального катетера через инфундибулум в ампулу (рисунок 2A-2C). Не продвигайтесь слишком далеко в яйцевод, чтобы предотвратить повреждение и кровотечение.
    14. Выпустите эмбрионы в яйцевод, осторожно надавливая на поршень шприца, соединенного с катетером (рисунок 2D-2F). Оба пузырька воздуха должны выйти из катетера.
    15. Удалите катетер сразу после того, как эмбрионы были освобождены.
    16. Промойте катетер, аспирирующую и высвобождающую манипулятивную среду, чтобы проверить отсутствие эмбрионов и подтвердить их успешный перенос.
    17. При желании повторите шаги с 1.4.11 по 1.4.16 с другой стороны матки.
    18. Извлеките эпидуральную иглу и камеру эндоскопа.
    19. Выпустите CO2 через эндоскопический троакар. Если в животе животного останется избыток газа, у него возникнут боли и дискомфорт.
    20. Удалите эндоскопический троакар из брюшной полости. Снимите хирургическое полотенце.
    21. Прекратить анестезию.
    22. Прочистите разрез, сделанный троакаром, раствором хлоргексидина. Закройте разрез, сделанный троакаром, микронизированным алюминием и пластиковой повязкой.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Лапароскопический перенос эмбрионов с помощью лапароскопии (внешний вид).А) Введение эндоскопического троакара (один порт). Б) Введение эндоскопической камеры и эпидуральной иглы (черная стрелка). В) Введение катетера для переноса эмбрионов (белая стрелка) через эпидуральную иглу.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Бычий сывороточный альбумин (BSA) ВВР332
Бупренорфина гидрохлоридAlvet Escartí 626По заказу лицензированного ветеринара.
Бусерелина ацетат Сигма Олдрич В3303
СО2 Эр Ликид 99921СО2 N48.
Фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS) Сигма ОлдричД5773 Без хлорида кальция
электробритва Остер Голден А5 078005-140-002
Эндоскопическая камера Оптомик Спейн С.АОП-714
Троакар для эндоскопа с силиконовым створоковым клапаном Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A.30114ГК Облегченная модель троакара.
Мыло с хлоррексидина диглюконатом Alvet Escartí0265DCCJ500B
Эпикранальная игла 23GAlvet Escartí514056353 Также можно использовать иглы меньшего размера.
Эпидуральный катетер Выгон корпоративный187,1
Эпидуральная игла Выгон корпоративный187,1
Глазная мазь Alvet Escartí No 5273
Лапароскопическое оборудование Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 26003 АА Лапароскоп Хопкинса®, прямообзорный лапароскоп 0º мм, длина 30 см, рабочий канал 5 мм.
источник света Оптомик Спейн С.АФибролюкс 250
Механический инсуффлятор CO2 Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A.Эндофлатор®
Силиконовая трубка для инсуффлатоr Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A.20400040
Стереомикроскоп Лейка MZ16F Есть более дешевые варианты, такие как Leica MZ8 или Nikon SMZ-10 или SMZ-2B, и это лишь некоторые из них.
Кроликов Политехнический университет Валенсии Линия АМожно использовать и другие материнские линии, такие как Line V или Line HP.
Кабель См. См.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи