Доставка генов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса: метод доставки трансгенов и кардиакальной специфической экспрессии в модели грызунов

Аннотация

Источник: Ding, J. et al. Получение rAAV9 для сверхэкспрессии или нокдауна генов в сердцах мышей. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео мы демонстрируем доставку рекомбинантных аденоассоциированных вирусных генов у мышиного щенка. Этот метод помогает в изучении экспрессии генов в клетках-мишенях.

Протокол

1. Лечите новорожденных мышей rAAV9 в P0,5-P2,5 путем подкожной инъекции.

1. Предварительно наполните инсулиновый шприц 29G1/2, 0,33 x 12,7 мм раствором рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 (rAAV9). Будьте осторожны, удаляйте пузырьки воздуха.
2. Держите щенка, находящегося под криоанестезией, в одной руке большим и указательным пальцами. Перед инъекцией промокните кожу спины щенка тампоном, пропитанным 70% изопропиловым спиртом, чтобы поддерживать стерильное состояние. Введите иглу шприца в передне-дорсальную подкожную клетчатку животного под углом от 5 до 10°. Введите 50-70 мкл раствора rAAV9 с помощью инсулинового шприца.
   ПРИМЕЧАНИЕ: rAAV9 также может быть введен мышью через внутрибрюшинную или внутривенную инъекцию. Может быть получена эффективная экспрессия доставленных генов в сердце. Тем не менее, внутрибрюшинное введение иногда может привести к утечке сцеживания в печени. После инъекции состояние щенков контролировалось каждый день.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Вектор rAAV9	Векторное ядро Penn	С1967