Методическая статья

Окрашивание срезов тканей крезил-фиолетовым: процедура окрашивания для визуализации хрящей и костей в замороженных срезах эмбриона мыши

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Wu, Meng, et al., Лазерный захват микродиссекции эмбрионального хряща и кости мыши для анализа экспрессии генов. J. Vis. Exp.(2019)

Это видео описывает процедуру окрашивания крезиловым фиолетовым цветом для визуализации костей и хрящей в корональных срезах замороженных эмбрионов мыши. Эта техника окрашивания помогает дифференцировать кости и хрящи с различными цветами от окружающих тканей.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка образцов для микродиссекции лазерного захвата

  1. Приготовьте растворы для окрашивания и обезвоживания.
    1. Поместите по 45 мл 80% этанола в каждую из трех центрифужных пробирок объемом 50 мл на льду. Обозначьте их как #1, #2 и #3. Разбавьте этанол водой, свободной от РНКазы/ДНКазы.
    2. Поместите 45 мл 95% этанола в центрифужную пробирку объемом 50 мл на лед.
    3. Поместите 45 мл 100% этанола в центрифужную пробирку объемом 50 мл на лед.
    4. Поместите 45 мл ксилола в центрифужную пробирку объемом 50 мл при комнатной температуре.
      ВНИМАНИЕ: Ксилол следует использовать в вытяжном шкафу.
  2. Кратковременно разморозьте предметное стекло мембраны PEN, приложив его к руке в перчатке, затем дважды промойте в течение 30 с каждый в 45 мл 80% этанола (#1 и #2) с перемешиванием в центрифужных пробирках объемом 50 мл для удаления OCT.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Важно удалить ОКТ перед окрашиванием, чтобы ослабленная во время окрашивания ОКТ не затеняла участки. Щипцы могут использоваться для облегчения удаления ОКТ, которая не смывается при перемешивании.
  3. Выложите горку на лист алюминиевой фольги. Нанесите пипеткой 0,8 мл 0,1% кресилфиолета в 50% этаноле на предметное стекло и окрашивайте в течение 30 секунд. Промойте предметное стекло в 45 мл 80% этанола (#3) в течение 30 с, а затем обезвожьте путем пропускания в течение 30 с через 45 мл 95% этанола, 100% этанола и ксилола в центрифужных пробирках объемом 50 мл.
  4. Поставьте горки на деликатную работу стеклоочистителя на 5 минут, чтобы слить ксилол и высушить секции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Центрифужная трубкаThermoFisher Scientific339653Конические стерильные полипропиленовые центрифужные пробирки, 50 мл
Крезилацетат фиалкиСигма-ОлдричС5042
Деликатный очиститель для задачThermoFisher Scientific06-666
Дистиллированная водаИнвитроген10977-015Без ДНКазы/РНКазы
Этанол, абсолютный (200 proof)ThermoFisher ScientificБП2818Класс молекулярной биологии
Стеклянная мембранная горка PENLeica Microsystems11505158
ОКТ-соединениеНауки электронной микроскопии102094-106
Средство для обеззараживания РНКазыСигма-ОлдричР2020Средство для обеззараживания РНКазы для очистки поверхностей
ксилолСигма-Олдрич214736

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Tissue Section StainingCartilage VisualizationBone VisualizationEthanol DehydrationXylene ClearingLight MicroscopyProteoglycan StainingPhosphate Group Binding

Похожие статьи