$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Окрашивание и срез мозга
- После эксперимента по окклюзии средней мозговой артерии удалите мозг, включая ствол мозга, из черепа и промойте его в ледяном PBS.
- Выберите правильный размер матрицы мозга из нержавеющей стали (см. Таблицу материалов) в зависимости от веса животных (рисунок 1В). Поместите мозг вентральной стороной вверх в матрикс мозга.
заметка: При нахождении в матрице вентральная поверхность мозга должна быть параллельна верхней поверхности формы.
- С помощью лопаток ограничьте лобную и каудальную части (по 2 лопасти с обеих сторон) головного мозга.<бр/>
заметка: Необходимо использовать бритвенные лезвия, совместимые с матрицей нарезки. В целом, совместимое лезвие бритвы с одним лезвием (толщина до 0,01 дюйма (0,254 мм)) можно использовать для разрезания мозга крысы.
- Поместите лезвия частично (не до конца разрезая мозг) в каналы между первым и последним лезвиями. Когда все лезвия вставлены и расположены параллельно, нажмите на все лезвия ладонью одновременно, чтобы разрезать мозг на 2 мм корональные срезы.
- Крепко возьмитесь за лезвия по бокам двумя пальцами и извлеките их вместе со срезанным мозгом из матрицы.
- Разложите срезы мозга один за другим в лотке (70 мл, 72 x 72 мм). Располагая ломтики, следите за тем, чтобы передняя поверхность каждого ломтика всегда была обращена вверх.
- Налейте теплый (+37 °C) 1% раствор TTC в PBS на срезы мозга и инкубируйте их в течение 8 минут при температуре 37 °C в темно><те.
заметка: Во время инкубации срезы мозга должны быть полностью погружены в раствор ТТС.
- После инкубации в 1% растворе TTC перенесите срезы мозга в синий пластиковый лоток для получения изображений. Расположите срезы мозга в последовательном порядке от лобной к каудальной части и с помощью скальпеля разделите полушария в сагиттальной плоскости.
