Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Окрашивание по Гимзе для анализа на образование колоний: процедура окрашивания in vitro для оценки пролиферативной способности мезенхимальных стволовых клеток

4.6K просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Schlaefli, P. et al. Ферментативный метод спасения мезенхимальных стволовых клеток из свернувшихся образцов костного мозга. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео мы демонстрируем процедуру окрашивания по Гимзе для оценки пролиферативного потенциала мезенхимальных стволовых клеток для формирования жизнеспособных колоний. Краситель Гимзы — это нейтральный краситель, состоящий в основном из лазурных и эозиновых красителей, которые обладают избирательным сродством к клеточным компонентам в зависимости от их заряда.

Протокол

1. Посев для экспансионной клеточной культуры и планшетов с КОЕ

  1. Ресуспендируйте клетки (состоящие из эритроцитов и мононуклеарных клеток) в 50 мл базальной среды: альфа-МЕМ с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ЕД/мл пенициллина, 100 мг/мл стрептомицина и 2,5 мг/мл амфотерицина В. Подсчитайте клетки, разведенные в соотношении 1:10 в растворе Трипана Блю с использованием камеры Нейбауэра.
  2. Поместите клетки в колбы для клеточных культур с плотностью 5 x 10⁷ клеток/см² и инкубируйте в увлажненном инкубаторе при температуре 37 °C. Если это возможно, используйте гипоксические условия (5% кислорода). Для контроля анали....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Базальные средние компоненты
ПенСтрептокк 100ХGibco15140122
Человеческий FGF-базовыйПепротех100-18В
MEM Alpha с нуклеозидом, со стабильным глутаминомАмимед1-23С50-И
Термоинактивированный FBSАмимед2-01Ф36-И
Амфотерицин ВАпплименемА1907
родовой
ПБСАпплименем964.91
Морилка GiemsaАпплименемА0885
Расходные материалы
Примария клеточная посуда для стрижкисокол353803
Колба для клеточных культур - Flask T300ТЭС90301
оборудование
Полосатая серологическая пипетка 5млКорнинг4487-200 шт.
Инкубатор увлажненный Heracells 240Термонаучная51026331
Heraeus Multifuge 1S-RТермонаучная75004331
Сталь

Больше статей

Фиксация метаноломокрашивание лазурью Bокрашивание эозином Yподсчет колонийклетки костного мозгакультура клеток