Окрашивание по Папаниколау: методика визуализации цитологических особенностей трубных клеток

Аннотация

Источник: Chen, H. et al. Цитология маточных труб как перспективный инструмент для раннего выявления рака яичников. J. Vis. Exp. (2017).

В этом видео мы демонстрируем модифицированный протокол окрашивания по Папаниколау для изучения цитологии маточных труб. Эта методика может быть использована для визуализации цитологических особенностей злокачественных и доброкачественных эпителиальных клеток маточных труб.

Протокол

1. Модифицированный протокол окрашивания Папаниколау

1. Окрашивайте смазанные ткани предметные стекла, выполняя автоматизированную процедуру окрашивания, как показано в таблице 1.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Метод окрашивания представляет собой модификацию метода окрашивания по Папаниколау, который мы обычно используем для негинекологических образцов. Мы используем автоматизированный тканевый процессор для окрашивания некоторых стекол. В этом исследовании мы выбрали процедуру окрашивания без синдрома Гини, а не процедуру окрашивания по методу Гин. В качестве эозина используется EA-65, вместо EA-50, используемого для гинекологических препаратов (мазок Папаниколау). Кроме того, OG-6 в процедуре окрашивания по Гину, которая в основном предназначена для окрашивания плоскоклеточных клеток, не включен в процедуру окрашивания, поскольку в этом исследовании не ожидается обнаружения плоскоклеточных клеток. EA65 (Eosin Azure) - это раствор для удаления пятен, состоящий из 3 красителей: Eosin Y, Fast green FCF и Bismarck brown Y. Процедура проиллюстрирована в таблице 1.
2. Выполните ручную быструю процедуру удаления пятен Папаниколау следующим образом:
   1. Опустите смазанную ткань предметное стекло в 95% этанол 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   2. Опустите предметное стекло в H₂O 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   3. Выведите предметное стекло в гематоксилине на 10 - 60 с.
   4. Опустите предметное стекло в H₂O 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   5. Окуните предметное стекло в 95% этанол 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   6. Установите предметное стекло в EA65 на 1 - 3 минуты.
   7. Опустите предметное стекло в H₂O 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   8. Окуните предметное стекло в 95% этанол 10 раз, при этом каждое погружение занимает около 1 с.
   9. Окуните предметное стекло в ксилол до тех пор, пока предметное стекло не станет прозрачным.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это модифицированная процедура окрашивания по Папаниколау. Этот метод используется в качестве более быстрого метода окрашивания в случаях с ограниченным временем или пространством, таких как аспирация тонкой иглой на месте и образцы STAT. Эта процедура обеспечивает окрашивание по качеству, сравнимому с автоматизированной процедурой окрашивания без Гин. Процедура проиллюстрирована в таблице 2.

Таблица 1: Шаги без гинекологических пятен.

95% этанол	5 мин
H2O	10 сек
Гематоксилин	15 сек - 3 мин
Дистиллированный H2O	5 мин
95% этанол	30 сек
ЕА65	2 - 5 мин
95% этанол	30 сек
95% этанол	30 сек
100% этанол	30 сек
100% этанол	30 сек
ксилол	30 сек
ксилол	5 мин

Таблица 2: Ручные шаги быстрого удаления пятен Папаниколау.

95% этанол	10 погружений
H2O	10 погружений
Гематоксилин	10 сек-1 мин
Дистиллированный H2O	10 погружений
95% этанол	10 погружений
ЕА65	1 - 3 мин
95% этанол	10 погружений
100% этанол	10 погружений
ксилол	Опустить до прозрачности

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Морилка Папаниколау, EA 65	Сигма Олдрич	HT40432
95% этанол	Сигма Олдрич	652261
100% этанол	Сигма Олдрич	493538
ксилол	Сигма Олдрич	214736
Гематоксилин	Сигма Олдрич	Н9627