Трихромное окрашивание Массона Голднера: методика визуализации коллагена в срезах сердца для выявления сердечно-сосудистого фиброза

Аннотация

Источник: Valentin, J., et al. Гистологическая количественная оценка хронического инфаркта миокарда у крыс. J. Vis. Exp.(2016).

Это видео демонстрирует дифференциальное окрашивание коллагеновых волокон, ядер и цитоплазмы в сердечной ткани для визуализации фиброзного роста, связанного с сердечными патологиями.

Протокол

1. Трихромное окрашивание по Массону-Гольднеру

1. Сделайте срезы тканей из залитых парафином сердечных блоков с помощью ручного микротома (толщина: 5 мкм).
2. Окрашивайте по одному предметному стеклу с каждой части сердца для каждой крысы (3 - 4 поперечных среза на предметное стекло) трихромным окрашиванием Массона-Гольднера.
   1. Растопите горки при температуре 60 °C в духовке. Под вытяжным шкафом депарафинизируйте их в ксилоле дважды по 10 минут каждый. Регидратируйте их в 100% этаноле, 95% этаноле, 70% этаноле и дистиллированной воде в течение 3 минут каждый.
   2. Закрепите их в растворе Буина на ночь. Затем промойте их в проточной воде из-под крана в течение 10 - 15 минут. Промойте их в дистиллированной воде. Инкубируйте их в гематоксилине Майера в течение 3 минут.
   3. Снимите предметные стекла и оставьте их в дистиллированной воде на 5 минут. Затем инкубируйте их в кислоте Fuchsin-Ponceau в течение 5 минут. Промойте их в 1% уксусной кислоте в течение 1 мин.
   4. Затем инкубируйте их в фосфомолибдоновой кислоте Orange G в течение 1 мин. Промойте их в 1% уксусной кислоте в течение 1 мин, инкубируйте в светло-зеленом красителе в течение 10 мин и промойте в 1% уксусной кислоте в течение 1 мин.
   5. Обезвожьте их до 70% этанола (30 секунд), 95% этанола (30 секунд) и 100% этанола (5 минут). Нанесите одну каплю смолистого монтажного средства на участки ткани, накройте их покровными стеклами и дайте им высохнуть.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Гематоксилин по Майеру	MHS32-1L	Сигма Олдрич
Кислота фуксин CI 42685	F8129-50G	Сигма Олдрич
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Сигма Олдрич
оранжевый G CI 16230	O3756-100G	Сигма Олдрич
Светло-зеленый CI 42095	L5382-25G	Сигма Олдрич
Ксилол	10315083	ХаниВелл
Абсолют этанола	10303990	ХаниВелл
Стереологический микроскоп	СМ2800	Компания Nikon
формальдегид	99340	Реактолаб
Встраиваемая кассета	К113.1	Карл Рот
Программное обеспечение для измерения изображений Bersoft		Bersoft.com	Лицензионное программное обеспечение

Кабель