Методическая статья

Метод двойного окрашивания: техника визуализации взаимодействия растений и грибов с использованием рутения красного и лактофенола хлопкового синего

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Marques, J. P. R., and Nuevo, L. G. метод двойного окрашивания для обнаружения пектина при взаимодействии растений и грибов. J. vis. Exp. (2022).

Это видео демонстрирует метод двойного окрашивания с использованием рутения красного и лактофенолового хлопкового синего для визуализации пектинов и хитинов во время взаимодействия растений и грибов в растении кофейной ржавчины. Процедура помогает понять защитные механизмы растений во время грибковых инфекций.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Процесс двойного окрашивания

  1. Начните с ультратонких, пропитанных смолой листов кофе арабика cv. Catuaí, зараженных кофейной ржавчиной. Налейте на срезы 2 мл 5% хлопкового синего в лактофеноле (40% глицерина, 20% фенола и 20% молочной кислоты в воде) и нагрейте их на горячей плите при 45 °C в течение 5 минут (рисунок 1A).
  2. Удалите излишки красителя, трижды промыв предметное стекло в стакане, наполненном дистиллированной водой (рисунок 1B-D).
  3. Окрашивать 2 мл 0,01% рутения красного в воде на 1 мин (рис. 1E).
  4. Удалите излишки красителя, трижды промыв предметное стекло в стакане, наполненном дистиллированной водой (рис. 1F, G).
  5. Нанесите каплю дистиллированной воды на срезы и накройте срезы покровным стеклом размером 24 мм x 60 мм для проведения светового микроскопического анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Подробная информация об отдельных этапах протокола двойного окрашивания. (A) Накройте срезы каплями лактофенола хлопкового синего цвета и нагрейте предметные стекла на горячей плите до 45 °C. (B-C) Удалите излишки красителя, промыв в дистиллированной воде. (D) Срезы на предметных стеклах после мытья (обозначены стрелками). (Д) Накройте срезы каплями рутен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
КонфоркаДюбессерSSCD25X30-110Вокрашивание
Хлопковый синий лактофенолMetaquímica70СОЛСИГ024629окрашивание
микроскопияЦейсс#490040-0030-000Захват изображения
Пластиковый поддон для формовочных чашекЭМС10176-30окрашивание
Рутений красныйЛАБоуза#006004окрашивание
Программное обеспечение Axion VisionЦейсс#410130-0909-000Захват изображения

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи