Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Количественная оценка фиброза тканей
- Поместите фиксированную параформальдегидом сердечную ткань на устройство для разрезания тканей и разрежьте срезы толщиной 2 мм. Поместите срезы ткани в закладную кассету. Обезвоживайте ткань с помощью серии градуированных спиртовых ванн (50%, 75%, 95% и 100% в течение 1 часа каждая).
- Инфильтрируйте ткань ксилолом в течение 1 часа и, наконец, в воск в течение 1 часа. Поместите инфильтрированную ткань в закладную кассету и заделайте ее парафином. Храните внедренные ткани в парафиновых блоках при комнатной температуре до микротоминга.
- Разрежьте внедренную ткань на участки толщиной 4 мкм. Поместите секции на водяную баню при температуре 45 ºC. Опустите стеклянную горку в водяную баню под углом и постепенно приближайтесь к краям парафинового сечения, чтобы обеспечить частичное крепление к горке.
- Перемещайте предметку внутрь и наружу ванны, чтобы удалить потенциальные воздушные карманы под секцией салфетки и облегчить ее крепление. Высушите предметные стекла при температуре 37 ºC в течение 1 часа и храните их при комнатной температуре для гистологического окрашивания.
- Поместите горку в бак. Депарафинизируйте предметное стекло ксилолом в течение 30 минут и регидратируйте его в последовательно разбавленном спирте (95%, 75% и 50% в течение 3 минут) и, наконец, в дистиллированной воде. Используйте подходящий раствор красного пикрозиуса, чтобы полностью покрыть участки ткани на 1 час. Промойте стекла в 0,5% растворе уксусной кислоты в течение двух смен, а затем выполните два полоскания в абсолютном спирте.
- Высушите затвор на воздухе и закрепите его в синтетической смоле с помощью покровного стекла. Сфотографируйте предметное стекло в видимом световом поле.
заметка: В красной области на фотографии показана красная позитивная зона пикрозириуса под микроскопом при 200-кратном увеличении. Рассчитайте процентное соотношение красной положительной зоны пикрозириуса по общей площади, которое указывает на степень фиброза.
