Окрашивание маулы на лигнин: методика определения характеристик распределения лигнина в срезах стеблей Arabidopsis Thaliana

Аннотация

Источник: Pradhan Mitra, P. et al., Гистохимическое окрашивание вторичных элементов клеточной стенки Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

В этом видео мы описываем технику окрашивания Мауле для окрашивания сирингиллигнина, присутствующего в специализированных растительных клетках. Этот метод окрашивания помогает охарактеризовать распределение лигнина в ксилеме и межфасцикулярных волокнах.

Протокол

1. Окрашивание Mäule

1. Растворите 0,2 г марганцовки в 40 мл дистиллированной воды для приготовления 0,5% раствора марганцовки. Хранить в темной бутылке при комнатной температуре не более 7 дней.
   1. Приготовьте 3,7% раствор HCl, добавив 1 мл концентрированной HCl (37 N) в 9 мл дистиллированной воды (1:10). Приготовьте свежий 3,7% раствор HCl в день эксперимента. Убедитесь, что используемый стоковый раствор 37 N HCl не слишком старый. Концентрированный раствор гидроксида аммония (14,8 М) следует хранить при температуре 4 °С, чтобы предотвратить снижение молярности насыщенного раствора.
2. Переложите срезы стебля в микроцентрифужну....

Результаты

Рисунок 1. Окрашивание Мяуле поперечных срезов стеблей A. thaliana. Окрашивание Mäule (красный цвет) на срезе стебля A. thaliana дикого типа, показывающее нормальное отложение лигнина в стенках межфасцикулярных волокон и ксилемных клеток (A-E). Указываются положения эпидермиса и коры головного мозга (Ep), межфасцикулярных волокон (Fi), сердцевины (Pi) и ксилемы (Xy). Увеличение: Панель А: 5X; Панель B: 10X; Панель C: 20X; Панели D и.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
агароза	EMD	MERC2125	Номер CAS: 9012-36-6
соляная кислота	EMD	НС0603-75	Номер CAS: 7647-01-0
Вибратом	Лейка	Микротом с вибрационным лезвием Leica VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/ продукты/секция/вибролезвие-микротомы/детали/продукт/ leica-vt1000-s/
бритва	Американская компания по производству безопасных бритв	Товар # 60-0139-0000	Двухлезвийное лезвие из нержавеющей стали (Personna Super)
Микроцентрифужные пробирки с завинчивающейся крышкой (2 мл)	ВВР	16466-044
Микроцентрифужные пробирки (0,6 мл)	Аксиген Сайентифик	MCT-060-C
Тканевый клей	Тед Пелла Инк	10033	Хранить при температуре 4 °C или 20 °C в течение 3 месяцев и дольше
Фотоаппарат с ПЗС-чипом без механического затвора	Хамамацу	С4742-95
Программное обеспечение камеры	Молекулярные приборы	Версия MetaMorph 7.7.0.0
Воображаемый анаилсис	саман	Фотошоп CS4
Микро Чехол Бокал, Квадрат, No1	ВВР	48366-067	Защитные стекла 22 x 22 мм (7/8 x 7/8 дюйма) устойчивы к коррозии
Матовые микрослайды, 1 мм	ВВР	48312-003	75 x 25 мм - 1 мм
Гидроксид аммония	EMD	АХ1303-6	Номер CAS: 1336-21-6
Марганцовка	сигма	223468	Номер CAS 7722-64-7