Окрашивание в красный цвет Конго: метод визуализации отложений целлюлозы в срезах стеблей растений

Аннотация

Источник: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Гистохимическое окрашивание вторичных элементов клеточной стенки Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

В этом видео мы демонстрируем метод окрашивания конголезного красного цвета для визуализации отложений целлюлозы в срезах стеблей Arabidopsis thaliana.

Протокол

1. Красное окрашивание Конго

1. Растворите 0,5 г конго красного в 100 мл дистиллированной воды до приготовления 0,5% раствора конго красного.
2. Переложите срезы стебля в микроцентрифужную пробирку объемом 2,0 мл. Добавьте в тюбик 1 мл 0,5% раствора конго красного. Осторожно пипетируйте 0,5% раствор красного конго вверх и вниз, не повреждая срезы.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, не вставляйте секции пипетки в наконечник пипетки, так как это может повредить секции.
3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 10 минут и повторить пипетирование. Затем следует еще 3 минуты инкубации при комнатной температуре.
4. С помощью пипетки объемом 1 мл вытяните 700 мкл 0,5% раствора красного конго. Добавьте 700 μл дистиллированной воды, чтобы смыть раствор конго красного. Повторите стирку 3-4 раза, пока моющий раствор не станет прозрачным.
5. Используйте пипетку объемом 1 мл с разрезанным кончиком таким образом, чтобы срезы можно было легко измельчить и не повредить их. Аккуратно нанесите пипетки на наконечник и предметное стекло микроскопа и накройте их покровным стеклом. Наблюдайте за образцами на предметном стекле микроскопа под воздействием синего света с помощью фильтра с полосой пропускания 560/40,<бр/> ПРИМЕЧАНИЕ: Не храните срезы в воде долго перед микроскопическим анализом, так как вода смоет красный цвет конго за 10-30 минут.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Конго Красный	сигма	С6277	Динатрий 3,3'-[[1,1'-бифенил]-4,4'-диилбис(азо)]бис(4-аминонафталин 1-сульфонат) [номер CAS 573-58-0]
Микроцентрифужные пробирки (0,6 мл)	Аксиген Сайентифик	MCT-060-C
Фотоаппарат с ПЗС-чипом без механического затвора	Хамамацу	С4742-95
Высокоскоростная цветная камера	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Программное обеспечение камеры	Молекулярные приборы	Версия MetaMorph 7.7.0.0
Воображаемый анаилсис	саман	Фотошоп CS4
Микро Чехол Бокал, Квадрат, No1	ВВР	48366-067	Защитные стекла 22 x 22 мм (7/8 x 7/8 дюйма) устойчивы к коррозии и равномерно толстые и плоские. Толщина No 1 составляет от 0,13 до 0,17 мм.
Матовые микрослайды, 1 мм	ВВР	48312-003	75 x 25 мм - 1 мм
Фильтрующий куб TX2	Лейка	11513851/11513885	Фильтр используется для анализа красного цвета Конго с полосой пропускания 560/40.