Количественная оценка образования мембранного оборки с помощью сканирующей электронной микроскопии

Abstract

Источник: Ahn, W. et al., Визуализация формирования мембранного оборка с помощью сканирующей электронной микроскопии.J. Vis. Exp. (2021)

Это видео демонстрирует подготовку образцов, фиксацию и визуализацию макрофагальной клетки, которая отображает мембранные оборки, с помощью сканирующей электронной микроскопии, SEM. Подробная информация о морфологии и организации мембраны имеет решающее значение для понимания физиологического состояния клеток.

Protocol

1. Клеточная линия и клеточная культура

1. Выращивайте RAW 264,7 макрофагов в модифицированной среде Dulbecco Eagle Medium (DMEM) с добавлением 10% (об/об.) термоинактивированной фетальной сыворотки крупного рогатого скота (FBS), 100 МЕ/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина в увлажненном инкубаторе при 37 °C и 5%_CO2. Заменяйте питательные среды через день.
2. Когда клетки станут сливаться на 80%, промойте пластину два раза, используя стерильный PBS.
3. Отделите клетки, добавив 1000 мкл 0,5% трипсина-ЭДТА, и инкубируйте планшет для культивирования клеток в течение 3-5 минут в увлажненном инкубаторе при 37 °C.
....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,5% трипсин-ЭДТА	Gibco	15400-054
2% глутаральдегид	Науки электронной микроскопии	16320
4% параформальдегида	Санта Крус Биотехнологии	281692
5-(N-этил-N-изопропил)-амилорид	Сигма Лайф Сайнс	А3085
Углеродные клеевые вкладки	Науки электронной микроскопии	77825-09
Диметилсульфоксид	Корнинг	25-950-CQC
Модифицированный Eagle Medium от Dulbecco	Цитива Медико-биологические науки	SH30022.01
Falcon 24-луночный прозрачный планшет для культивирования клеток с плоским дном и обработанным TC многолуночным клеточным планшетом	сокол	353047
Фетальная бычья сыворотка	Биография Близнецов	900-108
HERAcell 150i CO2-инкубатор	Thermo Fisher Scientific	51026282
Hummer Model 6.2 Напыляемый коатер	Анатех США	No 58565
Сканирующий электронный микроскоп JSM-IT500HR
Защитное стекло микроскопа	Thermo Fisher Scientific	Тел.: 12-545-82
Стрептококк	Gibco	15140-122
Форбол 12-миристат 13-ацетат	Миллипора Сигма	No 524400
RAW 264.7 макрофаг	АТКС	АТКС ТИБ-71
Рекомбинантный М-КСФ человека	Пепротех	300-25
Samdri-790 Сушилка для критических точек	Исследовательская корпорация Тусимис	8778В
SEM Алюминиевые крепления для образцов	Науки электронной микроскопии	75220
Какодилат натрия	Науки электронной микроскопии	12300
Решение Trypan Blue	Thermo Fisher Scientific	15250061