$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Mtb-инфекция клеток, полученных из моноцитов
ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие шаги должны быть выполнены на объекте BSL-3.
- Ресуспендируйте гранулу Mycobacterium tuberculosis (Mtb) в бессывороточной среде RPMI в новой стерильной пробирке объемом 50 мл и отрегулируйте конечную концентрацию бактерий примерно до 5 x 106 КОЕ/мл.
- Удалите среду для культивирования клеток из 6-луночного планшета (планшетов), содержащего моноцитарные клетки. Добавьте 1 мл бессывороточной среды RPMI в каждую лунку. Добавьте 1 мл бактериальной суспензии на лунку для получения кратности инфекции (MOI) 5:1, т.е. 5 x 106 КОЕ на 106 макрофагов в 2 мл/лунку и инкубируйте планшеты в течение 4 ч при 37°C и 5%CO2.
- После инфицирования промойте клетки 3 раза 1 мл стерильного промывочного буфера для удаления внеклеточных бактерий. Наклоните пластину и осторожно снимите весь буфер для стирки с углов. Ресуспендируйте инфицированные Mtb моноцитарные клетки в 2 мл полной среды RPMI без антибиотиков и приступайте к окрашиванию проточной цитометрией или инкубируйте клетки в течение еще 24 ч (или других временных точек) до проточной цитометрии.