Количественное определение биоактивных интерферонов I типа с использованием репортерного анализа секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы

Abstract

Источник: Bego, M. G. et al., Оценка врожденного чувствительности CD4⁺ Т-клеток, инфицированных ВИЧ-1, плазмоцитоидными дендритными клетками с использованием системы ко-культивирования ex vivo. J. Vis. Exp. (2015)

Это видео демонстрирует анализ секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы с использованием репортерных клеток интерферона-α/β HEK-Blue для количественного определения интерферонов I типа (ИФН), высвобождаемых после стимуляции плазмоцитоидных дендритных клеток инфицированными CD4⁺ Т-клетками ВИЧ-1.

Protocol

1. Измерение биоактивного ИФН I типа с использованием репортерных клеток HEK-Blue IFN-α/β.

Примечание: Эти клетки были получены путем стабильной трансфекции клеток HEK293 с человеческими генами STAT2 и IRF9 для получения полностью активного сигнального пути ИФН I типа. Они также содержат секретируемый репортерный ген щелочной фосфатазы (SEAP) под контролем индуцируемого промотора ISG54 ИФН-α/β. Стимуляция этих клеток ИФН I типа активирует путь JAK/STAT/ISGF3 и индуцирует выработку SEAP.

1. Поддерживайте клетки HEK-Blue IFN-α/β в DMEM с добавлением 10% FBS. Наложите их с плотностью 50 000 ячеек на ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ячейки MT4	Программа реагентов NIH для СПИДа	120	Этот реагент был получен в рамках программы NIH AIDS Reagent Program, Division of AIDS, NIAID, NIH: MT-4 от доктора Дугласа Ричмана.
Репортерные ячейки HEK-Blu IFN-α/β	Инвивоген	HKB-IFNAB
РПМИ	зубр	350-000-КЛ
DMEM	зубр	319-005-CL
ФБС	зубр	080-150
ПХА-Л	Сигма-Олдрич	О2769
Комплект для выделения CD4+ Т-клеток II	Myltenyi	Тел.: 130-091-155
Набор для выделения дендритных клеток алмазной плазмоцитоидной плазмоцитоидной клетки II	Myltenyi	Тел.: 130-097-240
КВАНТИ-БЛЮ	Седарлейн	РЭП-QB2
2,5 мг/мл IgG человека	Сигма-Олдрич	И 4506