Методическая статья

Количественная оценка нагрузки Helicobacter pylori в инфицированном желудке мыши

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: D'Costa, K. et al., Мышиные модели инфекции Helicobacter и желудочных патологий. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео мы описываем протокол количественной оценки нагрузки Helicobacter pylori в тканях желудка мыши после заражения, чтобы подтвердить его колонизацию.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подтверждение бактериальной колонизации в желудке после инфекции

  1. Жизнеспособный подсчет H. pylori в желудке
    1. Дополняйте стерильные ГБА-планшеты дополнительными антибиотиками (200 мкг/мл бацитрацина и 10 мкг/мл налидиксовой кислоты) перед проведением подсчета колоний из инфицированных желудков мышей.
    2. Гомогенизируйте срезы желудка вручную, с помощью автоклавируемых полипропиленовых микропестиков, или с помощью инструмента для механической диссоциации (см. Таблицу материалов).
    3. Готовят дубликаты серийных разведений (от 10−1 до 10−2) полученных гомогенатов желудка в стерильных BHI.
      заметка: Решение о разведении следует принимать на основе типичной бактериальной нагрузки, полученной для данного штамма H. pylori, используемого для инфекции, а также продолжительности инфекции. Также можно использовать неразбавленные образцы.
    4. Разделите предварительно высушенные планшеты с HBA (ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить изоляцию отдельных колоний, планшеты с HBA следует нагреть и высушить в шкафу биологической безопасности или инкубаторе при температуре 37 °C в течение 10–15 минут перед использованием.) на три или четыре сегмента. Используя адаптацию методики Майлза и Мишры, добавьте по 10–100 мл каждого разведения на сегмент агаровой пластины и распределите с помощью стерильных пластиковых петель.
    5. Дайте тарелкам высохнуть, а затем поместите их в перевернутое положение (крышкой вниз) в банки с анаэробным газом. Для поддержания влажности в банки включите чашку Петри, содержащую воду.
    6. Инкубируйте банки при температуре 37 °C до образования колоний (обычно 4–7 дней).
    7. Перечислите сегменты, содержащие от 10 до 100 изолированных колоний.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Колонии H. pylori и рост H. felis на пластинах можно отличить от колоний других представителей мышиной желудочной микробиоты с помощью стандартных тестов на уреазу, каталазу и оксидазу. H. pylori и H. felis дали положительные результаты по всем трем тестам.
    8. Рассчитайте бактериальную нагрузку как (КОЕ/г ткани) по следующей формуле:
      [(Среднее количество подсчитанных колоний) × (фактор разведения) x (объемная пластина)]/(масса желудка).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Бактериологические реактивы
Оксоидный кровяной агар Основа No2Thermo Fischer ScientificCM0271BРастворить в деинонизированной воде перед стерилизацией
Дефибринированная кровь лошади премиум-классаАвстралийские этические биологические препаратыPDHB100
Bacto Brain Heart Infusion БульонBD BioscienceNo 237500Растворить в деинонизированной воде перед стерилизацией
Газовые пакеты CampyGenThermo Fischer ScientificCN0035A/CN0025A
антибиотики
ВанкомицинСигма ОлдричВ2002-1ГРастворять в деионизированной воде
Полимиксин ВСигма ОлдричП4932-5МУРастворять в деионизированной воде
Триметоприм (≥98% ВЭЖХ)Сигма ОлдричТ7883Растворить в 100% (абсолютном) этаноле
АмфотерицинAmresco (Астральный научный)Е437-100МГРастворять в деионизированной воде
Бацитрацин из Bacillus licheniformisСигма ОлдричВ0125Растворять в деионизированной воде
Наладиксовая кислотаСигма ОлдричН8878Растворять в деионизированной воде
Оборудование и изделия из пластика
Оксоидные анаэробные банкиThermo Fischer ScientificНР0011/НР0031
Пипетки Пастера COPANУслуги Interpath200КС01
Центрифуга Eppendorf 5810RСоберите бактериальные гранулы центрифугированием при 2 200 об/мин в течение 10 минут при 4°C
Парапленка МБемис, VWRРМ996
Микропестик Eppendorf для пробирок объемом 1,2 - 2 млСигма ОлдричZ317314Автоклавируемые полипропиленовые пестики, используемые для гомогенизации желудка
Диссоциатор GentleMACsМилтеньи БиотекТел.: 130-093-235Используйте предустановленные программы gentleMACS для тканей желудка мыши
Трубки M (оранжевый колпачок)Милтеньи Биотек30-093-236 (Английский
Кубитный флуориметрThermo Fischer ScientificВопрос 33216
Стерильная пластиковая петляЛабСервLBSLP7202
)

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи