Канюляция брыжеечных лимфатических протоков у крысы для сбора лимфатической жидкости

Аннотация

Источник: Trevaskis, N. L., et al. Модель крысы с канюлированным брыжеечным лимфатическим протоком: применение для оценки транспорта кишечных лимфатических препаратов. J. Vis. Exp. (2015).

Это видео демонстрирует технику канюлирования брыжеечного лимфатического протока у крыс. Этот метод обеспечивает прямой доступ ко всему объему компонентов, присутствующих в лимфатической жидкости.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Канюляция брыжеечного лимфатического протока

1. Поместите животное правой стороной к оператору. При необходимости выполняйте операцию с помощью хирургического микроскопа или без него.
2. С помощью стерильного лезвия скальпеля вскройте верхний слой брюшной мышечной стенки прямым разрезом 4 см, проходящим от средней линии (мечевидный отросток) до правого бока примерно на 2 см ниже грудной клетки (реберный край) (см. рисунок 1В).
3. Раскройте оставшиеся слои брюшной мышечной стенки от 4 - 5 мм латерально до средней линии до правого бока с помощью небольших хирургических ножниц (см. рисунок 1В).
4. Втяните тонкую кишку под стенку левой брюшной мышцы и удерживайте ее на месте, используя 2 - 3 куска стерильной марли, пропитанной обычным физиологическим раствором.
5. Перемойте крысу через пластиковый шприц объемом 10 мл, расположенный горизонтально под спиной крысы на уровне правой почки, чтобы облегчить визуализацию брыжеечного лимфатического протока.
6. Найдите верхний брыжеечный лимфатический проток: сосуд диаметром примерно 0,5 - 1 мм, который перпендикулярен правой почки и непосредственно рострально и параллельно брыжеечной артерии (пульсирующий темно-красный кровеносный сосуд; см. рисунок 1C).
   ПРИМЕЧАНИЕ: У крыс, не принимавших пищу натощак или крыс, получавших предварительную дозу масла, сосуд белый, непрозрачный и его легче визуализировать, чем у крыс натощак, у которых он довольно просвечивающий.
7. Осмотрите область, непосредственно каудальную по отношению к большому верхнему брыжеечному лимфатическому протоку и брыжеечной артерии, чтобы определить, присутствует ли второй, меньший добавочный лимфатический проток. Если она присутствует, заблокируйте поток лимфы через проток, перерезав проток и окклюзив его суперклеем, или наложите шов вокруг протока, чтобы гарантировать, что весь объем лимфы, вытекающей из кишечника, собирается из верхнего брыжеечного лимфатического протока.
8. Проведите пару прямых щипцов через околопочечное жировое ложе на нижнем крае правой почки и через слои соединительной ткани непосредственно под полой веной, в направлении, параллельном верхнему брыжеечному лимфатическому протоку.
9. С помощью кончика щипцов возьмитесь за лимфатическую канюлю и протяните ее через околопочечное жировое ложе так, чтобы один конец непосредственно примыкал к брыжеечному лимфатическому протоку, а другой был выведен из организма животного на уровне правой почки.
10. Изолируйте брыжеечный лимфатический проток от вышележащих слоев соединительной и жировой ткани путем тупой диссекции. Будьте осторожны, чтобы не проколоть или не повредить лимфатический проток.
11. Изолировав лимфатический проток, сделайте небольшое отверстие в лимфатическом протоке либо микроножницами, либо острым кончиком ювелирных щипцов, либо иглой 25 G. Будьте осторожны, чтобы не разорвать сосуд полностью.
12. Убедитесь, что лимфатическая канюля полностью заполнена раствором антикоагулянта (с помощью шприца и иглы 25 G) без воздушных зазоров. Введите лимфатическую канюлю примерно на 2-4 мм внутрь брыжеечного лимфатического протока через небольшое отверстие с помощью небольшой пары щипцов.
13. Понаблюдайте за лимфатической канюлей в течение пары минут. Наблюдайте за постепенным потоком кишечной лимфы от свободно собирающегося конца канюли, если канюляция прошла успешно. Если канюляция не увенчалась успехом, повторите шаги 1.8 - 1.12.
14. Если канюляция прошла успешно, закрепите канюлю, поместив небольшую каплю ветеринарного клея на входное отверстие в лимфатический проток. Следите за тем, чтобы не закупорить сосуд излишками ветеринарного клея.
15. Ожидая, пока ветеринарный клей схватится, наблюдайте за потоком лимфы в течение нескольких минут, чтобы убедиться, что процедура канюляции прошла успешно. Убедившись в успехе канюляции, осторожно снимите кусочки марли, которые были помещены в брюшную полость, и поместите тонкую кишку в исходное положение.
16. Предварительно взвесьте пробирки для сбора лимфы, пробирки для забора лимфы и крови и добавьте раствор антикоагулянта. Добавьте достаточное количество раствора антикоагулянта для достижения конечной концентрации 1 мг/мл ЭДТА в стерильной воде или 10 - 20 МЕ/мл гепарина в собранной лимфе или крови.
17. Поместите лимфатическую трубку с антикоагулянтом (шаг 1.16) на конец канюли для сбора свободно текущей лимфы.
18. Затем канюлируют двенадцатиперстную кишку для инфузии регидратационных растворов и/или составов.

Результаты

Рисунок 1. Фотографии (А) брюшной полости, выбритой для подготовки к канюляции лимфатического протока, (В) стенки брюшной мышцы, открытой прямым разрезом длиной 4 см, проходящим от средней линии к правому боку для доступа к лимфатическому протоку, и (В) верхнего брыжеечного лимфатического протока (в желтом круге) перпендикулярно правой почке.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стерильный физиологический раствор	Здравоохранение компании «Бакстер»	AHB 1307	Можно использовать любую марку. Пример здесь - пакетики с солевым раствором Baxter 100 мл, коробка по 50 штук
70 % этанола в воде	любой		Можно использовать любую марку
Раствор глюконата хлоргексидина (Microshield 4)	Ливингстон Интернэшнл	JJ60243L	Можно использовать любую марку. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
Раствор бетадина	Ливингстон Интернэшнл	БУ0510	Можно использовать любую марку. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
Подвздошный кетамил (Кетамин 100 мг/мл)	ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ	КЕТА I 1	http://www.provet.vom.au
Гепарин (35000 ме в 35 мл	СигмаФармасьютикалс	No 337220 (Английский	http://www.sigmaco.com.au
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля наружный диаметр 0,96 мм x внутренний диаметр 0,58 мм	Удлинители микротрубок	ПЭ8050	Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести полиэтиленовую трубку 0,96 х0,58 мм, 30 м
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля o.d. 0,8 мм x внутренний диаметр 0,5 мм	Удлинители микротрубок	ПЭ9658	Можно использовать любую марку. Примером здесь является полиэтиленовая трубка 0,8 х0,5 мм, 30 м
Маркеры	любой		Можно использовать любую марку
Ветеринарный клей	любой		Можно использовать любую марку
Иглы 23 калибра	Ливингстон Интернэшнл	DN23GX0.75ЛВ	Можно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 23GX0.75 дюйма, 100 / КОРОБКА. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
Иглы 25 калибра	Ливингстон Интернэшнл	DN25GX1.0LV	Можно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 25GX1.0 дюйма, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1 мл шприц	Ливингстон Интернэшнл	T3SS01TA	Можно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 1 мл Slip Tuberculin 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Шприц 10 мл	Ливингстон Интернэшнл	T3SS10SA	Можно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 10 мл Slip 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Марлевые тампоны	Ливингстон Интернэшнл	ГСК075	Можно использовать любую марку и нарезать ее до нужного размера. Пример здесь – марлевые тампоны с ватным наполнителем 7,5х7,5 см, 8 слоев. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Грелку	Ратек	ВТ1	Можно использовать любую марку, которая поддерживает температуру на уровне 37С. В качестве примера здесь можно привести поднос для подогрева Ratek.
Хирургический микроскоп	Цейсс	495005-0014-000	Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести стереомикроскоп Zeiss Stemi 2000-C с подставкой S Double Spot и светодиодом KL 300. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 х Маленькие хирургические ножницы	Инструменты для точных научных исследований (FST)	14060-09	Можно использовать любую марку. Пример здесь - FST Fine Scissors, 9 см с режущей кромкой 21 мм, острые, прямые. http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 х Щипцы с зубчатым изогнутым наконечником	Инструменты для точных научных исследований (FST)	11001-13	Можно использовать любую марку. Примером здесь являются щипцы стандартного шаблона FST 13 см с изогнутым наконечником 2,8x1,4 мм. http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32

)