Интрадуоденальная канюляция на модели крысы для иммунопатологических исследований

Аннотация

Источник: Trevaskis, N. L. et al., Модель крысы с канюлированным брыжеечным лимфатическим протоком: применение для оценки транспорта кишечных лимфатических препаратов.J. Vis. Exp.(2015)

Это видео демонстрирует внутридуоденальную канюляцию в модели крысы. После обезболивания крысы располагается двенадцатиперстная кишка и создается небольшой прокол. J-образная канюля со скошенным кончиком аккуратно вводится и закрепляется, а разрез закрывается. Модель канюлированной крысы позволяет проводить внутрикишечную инфузию для иммунопатологических исследований.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка за день до хирургического вмешательства

1. При необходимости постите крысу в ночь перед операцией. Обеспечьте крысе свободный доступ к воде.
2. Приготовьте растворы для введения крысе.
   1. Приготовьте раствор для регидратации, такой как стерильный физиологический раствор или раствор Рингера.
   2. При необходимости приготовьте обезболивающие растворы. Анестетик, использованный в описанных здесь экспериментах, состоял из «Коктейля 1», приготовленного путем смешивания 1,9 мл кетамина 100 мг/мл, 0,5 мл ксилазина 100 мг/мл, 0,2 мл ацепромазина 10 мг/мл и 2,5 мл физиологического раствора, и «Коктейля 2», состоящего из 1 мл кетамина 100 мг/мл и 0,1 мл ацепромазина 10 мг/мл. ПРИМЕЧАНИЕ: Ингаляционный изофлуран или севофлуран могут быть предпочтительными, поскольку они могут обеспечить хирургическую плоскость анестезии в течение более длительного периода времени.
3. Приготовьте раствор антикоагулянта, содержащий 10 мг/мл этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в стерильной воде или 10 МЕ/мл гепарина в физрастворе для промывания лимфатической канюли. Также приготовьте антикоагулянтный раствор, содержащий 2,5 - 10 МЕ/мл гепарина в физрастворе для промывания канюли сонной артерии.
4. Подготовьте полиэтиленовую канюлю для введения в двенадцатиперстную кишку (внешний диаметр 0,96 мм, внутренний диаметр 0,58 мм).
   1. Разрежьте канюлю до необходимой длины (обычно 25 - 30 см для канюли двенадцатиперстной кишки) и поместите скос на кончик канюли с помощью стерильного хирургического лезвия (см. рисунок 1).
      заметка: Это облегчает введение канюли и снижает частоту закупорки канюли после введения.
   2. Поместите J-образную опорную точку в интрадуоденальную канюлю, накрутив небольшую часть канюли обратно на себя, нагрев ее зажигалкой или горячей пластиной, а затем разрезав по размеру (см. рисунок 1).
5. Присоедините лимфатическую канюлю к игле 25 G и шприцу, содержащему раствор антикоагулянта (приготовленный на шаге 1.3). Заполните лимфатическую канюлю раствором антикоагулянта и оставьте раствор в канюле на ночь (O/N), чтобы уменьшить частоту образования тромбов в лимфатической канюле во время сбора лимфы.
6. Подготовьте пробирки для забора лимфы и крови. Предварительно взвесьте пробирки для сбора лимфы, пробирки для забора лимфы и крови и добавьте раствор антикоагулянта. Добавьте достаточное количество раствора антикоагулянта для достижения конечной концентрации 1 мг/мл этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в стерильной воде или 10 - 20 МЕ/мл гепарина в собранной лимфе или крови.

2. Подготовка непосредственно перед началом хирургической процедуры

1. Проверьте канюли, промыв их стерильным физиологическим раствором или антикоагулянтным раствором, чтобы убедиться в их патентованности.
2. Подготовьте крысу к хирургическому вмешательству.
   1. Анестезируйте крысу на протяжении всей операции и периода сбора образцов.
      1. Например, начните анестезию с подкожного введения 1,5 мл/кг Коктейля I (из шага 1.2.2) в кожную складку на задней части шеи крысы с помощью шприца объемом 1 мл, прикрепленного к игле 25 G. Поддерживайте анестезию путем внутрибрюшинного введения 0,44 мл/кг Коктейля 2 (начиная с шага 1.2.2) примерно каждый час по мере необходимости, используя шприц объемом 1 мл, прикрепленный к игле 25 G.
      2. Перед началом операции убедитесь, что глубина анестезии достаточна, наблюдая за частотой дыхания, движением усов, мышечным тонусом и реакцией на раздражители, такие как защемление ноги. При необходимости вводите дополнительную анестезию.
   2. Сбрейте шерсть с хирургических областей, к которым относится правая сторона живота, для канюляции двенадцатиперстной кишки.
   3. Очистите хирургические области асептически с помощью раствора повидон-йода или раствора хлоргексидина и скраба из 70% этанола. Повторите это 3 раза для каждой области, завершив окончательным очищением 70% этанолом.
3. Положите животное в лежачем положении на спину на чистую простыню над нагретой хирургической прокладкой (37 °C).

3. Канюляция двенадцатиперстной кишки

1. Поместите животное правой стороной к оператору. При необходимости выполняйте операцию с помощью хирургического микроскопа или без него.
2. С помощью стерильного лезвия скальпеля вскройте верхний слой стенки мышц живота прямым разрезом 4 см, проходящим от средней линии (мечевидный отросток) до правого бока примерно на 2 см ниже грудной клетки (реберный край) (см. рисунок 2В).
3. Раскройте оставшиеся слои стенки мышц живота от 4 - 5 мм латерально до средней линии до правого бока с помощью небольших хирургических ножниц (см. рисунок 2В).
4. Втяните тонкую кишку под стенку левой брюшной мышцы и удерживайте ее на месте, используя 2 - 3 куска стерильной марли, пропитанной обычным физиологическим раствором.
5. Приложите канюлю двенадцатиперстной кишки к шприцу (например, 10 мл), наполненному раствором для регидратации.
6. Определите двенадцатиперстную кишку как ярко-розовый (с большим количеством кровеносных сосудов) отдел тонкой кишки, который при легком вытягивании вниз открывает желудок.
7. Сделайте небольшое отверстие для прокола в двенадцатиперстной кишке примерно на 2 см ниже места соединения желудка и двенадцатиперстной кишки (привратника) с помощью стерильной иглы 23 G.
8. Вставьте J-образный крючковатый конец канюли двенадцатиперстной кишки через отверстие для прокола. Закрепите на месте с помощью капли цианоакрилатного клея.
9. Начните гидратацию крысы, прикрепив канюлю к регидратационному шприцу, загруженному в инфузионный насос. Согласно литературным данным, скорость регидратации колеблется от 0,5 до 3 мл/ч.
10. После завершения канюляции лимфы и двенадцатиперстной кишки закройте разрез в брюшной мышечной стенке швами. Затем закройте разрез кожи, нанеся несколько капель тканевого клея (цианоакрилата) вдоль края разреза и сжав кожу с обеих сторон разреза вместе.

Результаты

Рисунок 1. Схематическое изображение формы скошенного кончика сонной артерии или лимфатической канюли, а также J-образного скошенного кончика дуоденальной канюли

.

Рисунок 2. Фотографии (А) брюшной полости, выбритой для подготовки к канюляции лимфатичес...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стерильный физиологический раствор	Здравоохранение компании «Бакстер»	AHB 1307	Можно использовать любую марку. Пример здесь - пакетики с солевым раствором Baxter 100 мл, коробка по 50 штук
70 % этанола в воде	любой		Можно использовать любую марку
Раствор глюконата хлоргексидина (Microshield 4)	Ливингстон Интернэшнл	JJ60243L	Можно использовать любую марку. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Раствор бетадина	Ливингстон Интернэшнл	БУ0510	Можно использовать любую марку. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Подвздошный кетамил (Кетамин 100 мг/мл)	ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ	КЕТА I 1	http://www.provet.com.au/
Подвздошный ксилазил (Ксилазин 100 мг/мл)	ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ	ТРО-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 для инъекций (Ацепромазин 10 мг/мл)	ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ	ВТГ-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Гепарин (35000 ме в 35 мл)	Сигма Фармасьютикалс	No 337220 (Английский	http://sigmaco.com.au/
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) дигидрат динатриевой соли	Сигма-Олдрич	Е1644	Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести динатриевую соль ЭДТА от Sigma.
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля наружный диаметр 0,96 мм x внутренний диаметр 0,58 мм	Удлинители микротрубок	ПЭ8050	Можно использовать любую марку. Пример здесь - полиэтиленовая трубка 0,8х0,5 мм, 30 м
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля наружный диаметр 0,8 мм x внутренний диаметр 0,5 мм	Удлинители микротрубок	ПЭ9658	Можно использовать любую марку. Примером здесь является полиэтиленовая трубка 0,96х0,58 мм, 30 м
линейка	любой		Можно использовать любую марку
Маркеры	любой		Можно использовать любую марку
прикуриватель	любой		Можно использовать любую марку
Цианоакрилатный клей	любой		Можно использовать любую марку
Иглы 23 калибра	Ливингстон Интернэшнл	DN23GX0.75ЛВ	Можно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 23GX0.75 дюйма, 100 / КОРОБКА. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0.75ЛВ
Иглы 25 калибра	Ливингстон Интернэшнл	DN25GX1.0LV	Можно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 25GX1.0 дюйма, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1.0ЛВ
1 мл шприц	Ливингстон Интернэшнл	T3SS01TA	Можно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 1 мл Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Шприц 10 мл	Ливингстон Интернэшнл	T3SS10SA	Можно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 10 мл Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Марлевые тампоны	Ливингстон Интернэшнл	ГСК075	Можно использовать любую марку и нарезать ее до нужного размера. Пример здесь – марлевые тампоны с ватным наполнителем 7,5х7,5 см, 8 слоев. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =ГСК075
Грелку	Ратек	ВТ1	Можно использовать любую марку, которая поддерживает температуру на уровне 37С. В качестве примера здесь можно привести поднос для подогрева Ratek.
Хирургический свет	Гарвардский аппарат	72-0215 с 72-0267	Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести Гарвардский аппарат V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, черный, диаметр волокна 4,7 мм (каждый рычаг). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
Хирургический микроскоп	Цейсс	495005-0014-000	Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести стереомикроскоп Zeiss Stemi 2000-C с подставкой S Double Spot и светодиодом KL 300. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Шелковый шов	Ливингстон Интернэшнл	DTSK163019F4	Можно использовать любую марку. Пример здесь * Отправьте этот товар по электронной почте моему другу 3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19 мм. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
Лезвия скальпеля	Инструменты для точных научных исследований (FST)	10020-00	Можно использовать любую марку. Примером здесь является лезвие скальпеля FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Рукоятка скальпеля	Инструменты для точных научных исследований (FST)	10004-13	Можно использовать любую марку. Примером здесь является ручка скальпеля FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 х Маленькие хирургические ножницы	Инструменты для точных научных исследований (FST)	14060-09	Можно использовать любую марку. Пример здесь - FST Fine Scissors, 9 см с режущей кромкой 21 мм, острые, прямые. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 х Щипцы с зубчатым изогнутым наконечником	Инструменты для точных научных исследований (FST)	11001-13	Можно использовать любую марку. Примером здесь являются щипцы стандартного шаблона FST 13 см с изогнутым наконечником 2,8x1,4 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 х гемостатика	Инструменты для точных научных исследований (FST)	13010-12	Можно использовать любую марку. Не все операторы используют гемостатики. В качестве примера можно привести микромоскитные гемостатики FST 12 см длиной 20 мм и шириной 1,3 мм с зубчатым концом, прямым наконечником. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 х Иглодержатель для швов	Инструменты для точных научных исследований (FST)	12001-13	Можно использовать любую марку. Примером здесь является иглодержатель FST 13 см Hasley с наконечником длиной 16 мм и шириной 1,9 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

) гг.