Создание мышиной модели плеврального диссеминированного рака легких

Аннотация

Источник: Yasui, H., et al. Фотоиммунотерапия в ближнем инфракрасном диапазоне для мышиных моделей плевральной диссеминации. J. Vis. Exp. (2021)

Это видео демонстрирует метод создания мышиной модели плевральной диссеминации путем введения суспензии клеток рака легких в грудную полость мыши с иммунодефицитом.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Генерация модели плеврального распространения

1. Получить клетки-мишени, экспрессирующие люциферазу, и суспензировать 1,0 × 10⁶ клеток-мишеней в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS)
   заметка: Внутригрудные раковые клетки, такие как рак легких и МПМ, подходят в качестве клеток-мишеней. Клетки, экспрессирующие люциферазу, были получены путем трансфекции гена люциферазы, и высокая экспрессия люциферазы была подтверждена после > 10 клеточных пассажей. Клетки культивировали в среде с добавлением 10% пенициллина бычьей сыворотки плода (100 МЕ/мл) и стрептомицина (100 мг/мл). Количество клеток корректировалось в зависимости от скорости роста опухоли и времени лечения (1,0 × 10, 5-6,0 × 10,⁶ клеток/масса тела).
2. Подготовьте 8-12-недельных самок гомозиготных афимических голых мышей, с предпочтительной массой тела 19-21 г.
3. Обезболивайте мышей во время процедуры изофлураном (введение: 4-5%, поддерживающая 2-3%); прижмите хвост пинцетом, чтобы подтвердить, что реакции нет.
4. Сделайте пробку из пенополистирола и прикрепите пробку к игле 30 G так, чтобы наконечник оставался на расстоянии 5 мм, чтобы предотвратить травмирование легких. Во избежание пневмоторакса согните кончик иглы чистыми щипцами или прижав его к твердому предмету, очищенному с 70% EtOH (Рисунок 1).
   осторожность: Будьте осторожны, чтобы не проколоть себя. Используйте щипцы, чтобы согнуть иглу. Не держите пробку при прикреплении ее к игле. Безопаснее воткнуть пробку перед заполнением ячеек в шприц
.
5. Наполните шприц (1 мл) клетками-мишенями и прикрепите иглу 30G с пробкой.
6. Перед процедурой продезинфицируйте грудную клетку животного 70% EtOH.
7. Проколите иглу в грудную клетку мыши через межреберье. Благодаря сопротивлению при ударе о ребра в то время, кончик иглы двигался вверх и вниз. После прохождения через межреберье прижмите шприц к мыши и введите 100 мкл клеток-мишеней (рис. 2).
   заметка: Мышь глубоко дышит, когда игла правильно входит в грудную полость. При изгибе кончика иглы можно было избежать пневмоторакса и неправильного введения клеток в легкое.
   заметка: Рекомендуется проводить пункцию правой грудной стенки, чтобы избежать риска прокола стенки сердца.
8. Покатайте мышь 2-3 раза, чтобы распространить клетки по всей грудной полости.
9. Верните мышь в чистую и теплую клетку и наблюдайте до тех пор, пока не начнет действовать. После процедуры мышь проснется от наркоза и будет вести себя нормально.

Результаты

Рисунок 1: Простое ручное устройство для трансплантации клеток. Приложите пробку из пенополистирола к игле 30G так, чтобы наконечник оставался на расстоянии 5 мм. Кончик иглы должен быть согнут во избежание пневмоторакса.

Рисунок 2: Введение клеток-мишеней в гр...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Шприц объемом 1 мл	ТЕРУМО	СС-01Т	для эксперимента на мышах
Игла 30G	Нипро	1907613	для эксперимента на мышах
BALB/cSlc-nu/nu	Япония SLC
D-люциферин (калийная соль)	Кайман Кемикал	No 14681	для биолюминесцентной визуализации и DLIT
Изофлуран	Вако	095-06573 (Английский	для мышиной анестезии
0,25 вт/об% трипсин-1ммоль/л раствор ЭДТА 4Na с феноловым красным	Вако	209-016941 (Английский	для клеточных культур
RPMI-1640 с L-глутамином и красным фенолом	Вако	189-02025	для клеточных культур

) )