Окрашивание флуоресцеином на модели аутоиммунной крысы с сухим глазом для изучения повреждений роговицы

Аннотация

Источник: Hou Ahiua, et al. Хроническая аутоиммунная модель сухого глаза у крысы с увеличением эффекторных Т-клеток памяти в ткани глазного яблока. J.Vis. Exp. (2017)

Это видео демонстрирует окрашивание поврежденной роговицы с использованием флуоресцеинового красителя для оценки степени аутоиммунной болезни сухого глаза на модели крысы. Зеленые флуоресцентные пятна окрашенных коллагеновых волокон указывают на поврежденные эпителиальные клетки роговицы.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Оценка признаков сухого глаза

Измерьте повреждение роговицы с помощью окрашивания флуоресцеином.

1. Добавьте 2 мкл 0,2% флуоресцеина в роговицу крысы. Пассивно откройте и закройте веки крысы 3 раза пальцем в перчатке, чтобы распределить флуоресцеиновый краситель по поверхности глаза.
2. Через 1 минуту наберите 1 мл физиологического раствора с помощью шприца объемом 3 мл (без прикрепления иглы), расположите шприц примерно в 2-3 мм перед роговицей и осторожно нанесите физиологический раствор на глаз.
3. Получение изображений под кобальтово-синим фильтром (т.е. ~400 нм) окулярного микроскопа с выключенным фоновым освещением.
   заметка: Впоследствии изображения были проанализированы с помощью системы оценки, модифицированной по сравнению с предыдущими публикациями. Затем изображения анализировали путем субъективной оценки количества, площади и интенсивности зеленых пятен от 0 до 2, где 0 указывает на их отсутствие, 1 указывает на точечное окрашивание менее 50 пятен, а 2 указывает на точечное окрашивание более 50 пятен.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
реагент
Раствор флуоресцеина натрия	Бауш и Ломб Ю.К. Лимитед	NA
оборудование
Стереомикроскоп с кольцевым световым осветителем и камерой	Карл Цейсс	NA