Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита на мышиной модели

Аннотация

Источник: Barthelmes, J. et al., Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей и оценка распределения иммунных клеток в различных тканях в зависимости от болезни.J. Vis. Exp.(2016)

Видео демонстрирует индукцию экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита в мышиной модели путем введения комбинации гликопротеинов миелина олигодендроцитов и инактивированной Mycobacterium tuberculosis. Модель позволяет исследователям изучать механизмы заболевания и тестировать терапевтические вмешательства.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит или модель EAE

1. Индукция модели EAE
   1. Используйте 10-13-недельных самок мышей 129S4/SvJae×C57BL/6 для индукции EAE.
   2. Дайте мышам подкожную инъекцию в верхнюю и нижнюю часть спины энцефалитогенного пептида MOG_{35 - 55} (гликопротеин миелина олигодендроцитов) (200 мкг), эмульгированного в 200 мкл полного адъюванта Фрейнда (КФА), содержащего 400 мкг Mycobacterium tuberculosis.
      заметка: В качестве отрицательного, не вызывающего заболевания фиктивного контроля можно использовать неполный адъювант Фрейнда, содержащий Mycobacterium tuberculosis, в том же объеме и тем же путем.
   3. После этого, и снова через 24 часа, дайте мышам внутрибрюшинную инъекцию коклюшного токсина (всего 0,2 мкг, разведенных в 200 мкл фосфатно-солевого буфера, PBS). Используйте необработанных мышей в качестве контрольной группы, чтобы иметь возможность сравнивать больных и здоровых животных.
      заметка: Также возможно индуцирование ЭАЭ с помощью 200 - 300 мкг пептида MOG_{35 - 55}, 300 - 500 мкг Mycobacterium tuberculosis в КФА и 0,2 - 0,3 мкг коклюшного токсина в объеме 0,1 - 0,2 мл на одну инъекцию.
   4. Начиная с одной недели после инъекции, ежедневно осматривайте мышей на наличие клинических симптомов (см. шаг 1.2.1)
      заметка: День начала заболевания варьируется в разных экспериментах, но в условиях нашей лаборатории это примерно 11-й день, и, таким образом, здесь 14-й день определяется как 3 дня после начала заболевания. У всех мышей в настоящем исследовании развились клинические симптомы.

2. Подсчет очков мышам

1. Классифицируйте клинические симптомы по клиническим показателям следующим образом: 0) нет признаков, 0,5) дистальный паралич хвоста, 1) полный паралич хвоста, 1,5) хромой хвост и легкая слабость задних конечностей, 2) хромой хвост и выраженная слабость задних конечностей, 2,5) хромой хвост и паралич одной задней ноги, 3) хромой хвост и паралич обеих задних конечностей, 3.5) паралич обеих задних конечностей и слабость одной передней конечности (мышей, достигших этого балла, усыпляли в соответствии с местными этическими нормами).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Комплект EAE	Hooke Laboratories, Лоуренс, США	ЭК2110