Method Article

Название сотовый Инкапсуляция воздушно-капельным путем

DOI:

10.3791/316

⸱

October 1st, 2007

 ,  ,  ,  , 
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

In This Article

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH3T3 клетки подготовки:

А. Клетки для выброса

  1. Trypsinize клетки, затем разбавить 1:1 с ячейки СМИ, и переход от T75 колбу на 15 мл трубки Сокол
  2. Спином вниз клеток в гранулах центрифугированием, супернатант аспирацию и промыть клетки с DPBS
  3. Спином вниз клеток в гранулах снова, и аспирата супернатант
  4. Ресуспендируют клеток в СМИ
  5. Определить плотность клеток с гемоцитометра (~ 200 X 10 4 клеток / мл в колбе T75)
  6. Решение Центрифуга клетки, аспирацию супернатант, и ресуспендируют в соответствующую сумму средств массовой информации для различной концентрации клетка

Б. сотовый выброса

  1. Vortex клетки, прежде чем использовать для выброса
  2. Передача 200 мкл клеточного раствора в шприце
  3. Установить соответствующий режим генератора импульсов
    1. Для извлечения одной капли и несколько капель (очередей), установить генератор импульсов, чтобы "Е. БУР" режиме
    2. Для непрерывного выброса капли, установить генератор импульсов, чтобы "НОРМА" режиме
  4. Изменение параметров сигнала
    1. Установить высокий уровень и низкий уровень выходного напряжения: HIL до 5 В и LOL 0 В и убедитесь, что "LIM" светодиод
    2. Установить сигнал как прямоугольный импульс
    3. Изменение количества времени электромагнитный клапан открыт для выброса капли, изменив значение для "WID" или изменение рабочего цикла («Долг»)
    4. Изменение частоты выброса, изменив значение для "ЗА"
    5. Изменение количество капель, выброшенных в порыве, изменив значение для "БУР"
  5. Извлечь решение ячейки на подготовленное основание для работы с изображениями с микроскопом

С. Окрашивание

  1. Макияж раствор красителя с 0,5 мкл кальцеин-AM и 2 мкл гомодимера этидия на мл DPBS
  2. Погрузите подготовленное основание в раствор красителя
  3. Разрешить образец для инкубации в течение 10 минут при 37 ° С до визуализации

Эксперимент Проверка

  1. На Nikon Eclipse TE-2000 U Флуоресцентный микроскоп
    1. Пятно передовое программное обеспечение (Diagnostics, Inc)
    2. Live / Мертвые Пробирной

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Флуоресцентный микроскопNikon Instruments EclipseTE-2000 U
Электромагнитный эжекторРабочая частота: 1 кГц, 30 фунтов на квадратный дюйм, 50 нл ~ 0,5 мк. 12 В Драйвер клапана: 2,5 ампера ток
5 галлонов Портативный воздушный бакColemanPowermate CT5Сжатый воздух: 30 фунтов на квадратный дюйм
РегуляторыMarsh Bellofram
ГенераторHP8112AГенерация частоты срабатывания: 50 МГц
XYZ-каскадNewmark Systemsс шаговым двигателем: 6-дюймовый ход xy-ступени (NLS4-6-25), 2,5-дюймовый ход z-ступени (NLS4-2,5-25), 3-осевой контроллер (NSC-G3), разрешение 0,1 мкм
NIH 3T3Фибробластыклеточной линии
Трипсин0,05% раствор
NIH 3T3 клеточная среда
DPBSBuffer
T75Tissue culture flagging Пластиковые
конические тубы15 мл, для культуры тканей
клапанной ячейки давления импульсов

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell EncapsulationDroplet PrintingCell PrintingSolenoid ValveMotorized StageCell DensityHemocytometerLive Dead AssayCalcium AMEthidium Homodimer

Related Articles