Инкапсуляция фактора роста нерва в наночастицы высокой плотности, имитирующие липопротеины

Аннотация

Источник: Zhu, J., et al., Preparation and Characterization of Novel HPL-имитирующие наночастицы для инкапсуляции фактора роста нервов. J. Vis. Exp. (2017)

В этом видео демонстрируется поэтапная сборка наночастиц, имитирующих NGF, с использованием инкапсуляции с помощью протамина и самосборки на основе липидов для потенциальных приложений нейротрофической доставки.

Протокол

1. Получение наночастиц, имитирующих NGF ЛПВП

1. Растворите вспомогательные вещества, фосфатидилхолин (PC), сфингомиелин (SM), фосфатидилсерин (PS), холестерилолеат (CO) и D-α-токоферилполиэтиленгликоль сукцинат (TPGS), в этаноле для получения исходных растворов в концентрации 1 мг/мл.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Исходные растворы аликвотировали и хранили при -20 °C. Холестерилолеат хранился в темных бутылках. Исходные растворы PC, SM, PS и CO были стабильны до 6, 3, 12 и 12 месяцев соответственно при -20 °C. Раствор TPGS был стабилен в течение как минимум 12 месяцев при температуре -20 °C.
2. Смешайте 10 μL NGF (1 мг/мл в воде) с 10 μL протамина USP (1 мг/мл в воде) в микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 мл и дайте ей постоять 10 минут при комнатной температуре для образования комплекса.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Исходные растворы NGF и протамина были аликвотированы и хранились при -20 °C. Повторное замораживание и размораживание не рекомендуются для исходных растворов NGF.
3. Добавьте в стеклянный флакон 59 μл PC, 11 μL SM, 4 μL PS, 15 μL CO и 45 μL TPGS. Перемешайте и выпарите этанол под слабой струей азота в течение примерно 5 минут; Все вспомогательные вещества должны образовать маслянистую тонкую пленку на дне стеклянного флакона.
4. Добавьте 1 мл сверхчистой воды (тип 1) во флакон и гомогенизируйте при 9 500 об/мин (8 600 x г) в течение 5 минут при комнатной температуре для получения прототипа наночастиц (НЧ).
5. Готовый на шаге 1.2 комплекс добавить к опытному образцу НЧ и инкубировать при 37 °С в течение 30 мин при перемешивании с помощью небольшой полоски для перемешивания в стеклянном флаконе.
6. Охладите NP, помешивая при комнатной температуре, еще 30 минут. После того как он остынет, добавьте 106 мкл Apo A-I (1,49 мг/мл) и перемешайте при комнатной температуре в течение ночи, чтобы образовались окончательные НЧ, имитирующие NGF, имитирующие ЛПВП.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Рекомбинантный человеческий бета-NGF	Creative Biomart	NGF-05H
L-a-фосфатидилхолин (ПК)	Avanti	131601P	95%, яйцо, куриный
сфингомиелин (SM)	Avanti	860062P	мозг,
Фосфатидилсерин свиньи (PS)	Avanti	840032P	Мозг, свиной
холестерилолеат (CO)	Sigma	C9253
D-α-токоферилполиэтиленгликоль сукцинат (TPGS)	BASF	9002-96-4	Витамин Е полиэтиленгликоль сукцинат
протамина сульфат	Sigma	P3369	соответствует спецификациям
испытаний USPАполипопротеин А1, плазма крови человека	Athens Research & Technology	16-16-120101	1 мг в 671 мкл 10 мМ бикарбонат аммония, pH 7,4
Гомогенизатор	Tekmar	T 25-S1
Политронный гомогенизатор	Kinematica	PT 1200C