Внутримозговое лечение ресинфератоксином для десенсибилизации TRPV1 в головном мозге мышей

Аннотация

Источник: Fukushima, A., et al. Внутримозговожелудочковое лечение резинифератоксином и болевые пробы у мышей. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео показана процедура внутримозгового инъекционного введения резинифератоксина мышам для десенсибилизации рецепторов TRPV1 в головном мозге.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Внутримозговое введение: RTX

1. Обезболите мышей пентобарбитальной натриевой солью (60 мг/кг, внутрибрюшинно) и проверьте потерю рефлекса выпрямления.
2. Для внутримозгового лечения следует ввести 5 мкл ресинифератоксина (RTX) (20 мкг/мл) в правый боковой желудочек. В контрольной группе носитель (10% этанола, 10% полиоксиэтилена (20) сорбитана моноолеата и 80% искусственной спинномозговой жидкости (АЦФБ)) таким же образом.
   1. Пропустите одноразовую иглу 27-G через металлическую трубку (с внутренним диаметром 0,8 мм), чтобы обнажить кончик иглы 3,0–3,5 мм (рис. 1A).
   2. Продезинфицируйте голову мыши 70% спиртом и крепко держите чешуйчатые кости мыши пальцами (рисунок 1B). заметка: Обратите внимание на расположение чешуйчатых выступов, так как эти выступы будут служить ориентирами для инъекций.
   3. Переместите иглу в сторону на коже головы и найдите сагиттальный шов, так как кончик иглы зацепился за шов.
   4. Переместите кончик примерно на 1 мм вправо, затем переместите кончик рострально и найдите корональный шов. (Рисунок 1В).
   5. Медленно и вертикально введите иглу, введите раствор RTX примерно через 10 секунд и удерживайте его около 10 секунд.
   6. Медленно извлеките иглу и верните мышь в домашнюю клетку. Кровотечения обычно минимальны или отсутствуют. Если происходит сильное кровотечение, следует рассмотреть возможность использования другой мыши.

Результаты

Рисунок 1: Фотографические и схематические виды внутримозгового (внутривенного) введения. (A) Игла, используемая для внутривенного введения. (В) Схема мышиного черепа и движения кончика иглы. Чешуйчатые кости...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	используется для предварительной обработки s.c./i.c.v. и теста RTX
Пентобарбитала натриевая соль	Tokyo Chemical Industry	P0776	используется для анестезии
Этанол (99,5%)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	используется для растворения RTX
Полиоксиэтилен (20) Сорбитан моноолеат	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	используется для растворения RTX
25 мл Микрошприц	Hamilton	1702LT	используется для внутривенного введения
Одноразовая игла 26-го калибра	TERUMO	NN-2613S	используется для внутривенного введения