Оценка нейропротекторных эффектов кислотного посткондиционирования на мышиной модели ишемии головного мозга

Аннотация

Источник: Zheng, Y., et al. Экспериментальные модели для изучения нейропротекции кислотного посткондиционирования против церебральной ишемии. J. Vis. Exp. (2017)

В этом видео демонстрируется применение кислотного посткондиционирования (APC) для оценки его нейропротекторных эффектов против ишемического повреждения на мышиной модели окклюзии средней мозговой артерии (MCAO). В ней описываются этапы, связанные с реперфузией в модели MCAO, и применение APC во время реперфузии для смягчения эксайтотоксичности, окислительного стресса и гибели нейронов.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Окклюзия средней мозговой артерии (MCAO):
   1. Поместите и зафиксируйте мышь под наркозом (с помощью зонда лазерной допплеровской флоуметрии (LDF), прикрепленного к ее черепу) в лежачем положении и поддерживайте температуру ее тела с помощью тепловой лампы на протяжении всей операции. Продезинфицируйте горловину 70% этиловым спиртом.
   2. Сделайте парамедианный разрез кожи на шее с помощью скальпеля; тупыми щипцами рассеките мягкие ткани, чтобы обнажить сосуды. Добавьте одну каплю физиологического раствора в открытые ткани, чтобы сохранить их увлажненными.
   3. Рассеките общую сонную артерию от окружающих тканей и блуждающего нерва с помощью офтальмологических щипцов. Будьте осторожны, чтобы не повредить блуждающий нерв. Снова продезинфицируйте кожу шеи йодофором после того, как будет оголена общая сонная артерия.
   4. Поместите зажим микрососуда на дистальный конец общей сонной артерии, а затем завяжите мертвый узел шелковыми швами 6-0 на проксимальном конце. Расположите зажим как можно ближе для последующих операций. Следите за тем, чтобы длина судна между хомутом и мертвым узлом была как можно больше для последующих операций.
   5. Сделайте временный шов проксимальнее зажима, завязав свободный узел. Убедитесь, что между двумя узлами достаточно места для введения мононити.
   6. Сделайте небольшой продольный надрез между двумя узлами микроофтальмологическими ножницами. Убедитесь, что разрез находится как можно ближе к мертвому узлу для последующих операций. Будьте осторожны, чтобы не отрезать судно.
   7. Вставьте мононить с тупым кончиком диаметром 12 мм через разрез, чтобы войти в просвет артерии и продвинуть его на несколько мм. Затяните свободный узел вокруг кончика мононити, а затем снимите зажим.
   8. Продвигайте филамент во внутреннюю сонную артерию (на 10 мм для окклюзии средней мозговой артерии) с помощью офтальмологических щипцов до тех пор, пока программное обеспечение LDF не покажет резкое снижение (снижение кровотока на >80% от исходного уровня) кровотока. Запишите время начала окклюзии.
   9. Окклюзируйте среднюю мозговую артерию на 1 ч. Отрежьте зонд LDF и поместите мышей в инкубатор при температуре 30 °C на время окклюзии.
2. Реперфузия и кислотное посткондиционирование (APC):
   1. Повторно обезболите животных изофлураном, как описано выше, через 55 минут после начала окклюзии. Поместите и зафиксируйте мышей в лежачем положении. Откройте разрез на шее и снова обнажите общую сонную артерию.
   2. Аккуратно вытяните нить офтальмологическими щипцами после периода окклюзии для достижения реперфузии и превратите временный шов в постоянный, затянув узел.
   3. Для лечения ацидоза замените газ, вдыхаемый носовым обтекателем, на смесь газов, содержащую 20% CO₂, 20% O₂ и 60 % N₂ в течение 5 минут через 5, 50 или 100 минут после реперфузии. Закройте разрез прерывистым хирургическим швом.
   4. Поместите мышей в клетку с температурой 30 °C, пока они не придут в сознание, а затем верните мышей в чистые индивидуальные клетки. Обеспечьте мышей чашкой Петри с водой и увлажненным кормом. Внимательно наблюдайте за мышами после операции на предмет чрезмерной боли и смерти.

Материалы