$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
- Окклюзия средней мозговой артерии (MCAO):
- Поместите и зафиксируйте мышь под наркозом (с помощью зонда лазерной допплеровской флоуметрии (LDF), прикрепленного к ее черепу) в лежачем положении и поддерживайте температуру ее тела с помощью тепловой лампы на протяжении всей операции. Продезинфицируйте горловину 70% этиловым спиртом.
- Сделайте парамедианный разрез кожи на шее с помощью скальпеля; тупыми щипцами рассеките мягкие ткани, чтобы обнажить сосуды. Добавьте одну каплю физиологического раствора в открытые ткани, чтобы сохранить их увлажненными.
- Рассеките общую сонную артерию от окружающих тканей и блуждающего нерва с помощью офтальмологических щипцов. Будьте осторожны, чтобы не повредить блуждающий нерв. Снова продезинфицируйте кожу шеи йодофором после того, как будет оголена общая сонная артерия.
- Поместите зажим микрососуда на дистальный конец общей сонной артерии, а затем завяжите мертвый узел шелковыми швами 6-0 на проксимальном конце. Расположите зажим как можно ближе для последующих операций. Следите за тем, чтобы длина судна между хомутом и мертвым узлом была как можно больше для последующих операций.
- Сделайте временный шов проксимальнее зажима, завязав свободный узел. Убедитесь, что между двумя узлами достаточно места для введения мононити.
- Сделайте небольшой продольный надрез между двумя узлами микроофтальмологическими ножницами. Убедитесь, что разрез находится как можно ближе к мертвому узлу для последующих операций. Будьте осторожны, чтобы не отрезать судно.
- Вставьте мононить с тупым кончиком диаметром 12 мм через разрез, чтобы войти в просвет артерии и продвинуть его на несколько мм. Затяните свободный узел вокруг кончика мононити, а затем снимите зажим.
- Продвигайте филамент во внутреннюю сонную артерию (на 10 мм для окклюзии средней мозговой артерии) с помощью офтальмологических щипцов до тех пор, пока программное обеспечение LDF не покажет резкое снижение (снижение кровотока на >80% от исходного уровня) кровотока. Запишите время начала окклюзии.
- Окклюзируйте среднюю мозговую артерию на 1 ч. Отрежьте зонд LDF и поместите мышей в инкубатор при температуре 30 °C на время окклюзии.
- Реперфузия и кислотное посткондиционирование (APC):
- Повторно обезболите животных изофлураном, как описано выше, через 55 минут после начала окклюзии. Поместите и зафиксируйте мышей в лежачем положении. Откройте разрез на шее и снова обнажите общую сонную артерию.
- Аккуратно вытяните нить офтальмологическими щипцами после периода окклюзии для достижения реперфузии и превратите временный шов в постоянный, затянув узел.
- Для лечения ацидоза замените газ, вдыхаемый носовым обтекателем, на смесь газов, содержащую 20% CO2, 20% O2 и 60 % N2 в течение 5 минут через 5, 50 или 100 минут после реперфузии. Закройте разрез прерывистым хирургическим швом.
- Поместите мышей в клетку с температурой 30 °C, пока они не придут в сознание, а затем верните мышей в чистые индивидуальные клетки. Обеспечьте мышей чашкой Петри с водой и увлажненным кормом. Внимательно наблюдайте за мышами после операции на предмет чрезмерной боли и смерти.