Адаптация нейронов к повторяющемуся гипоксическому прекондиционированию у мышей

Аннотация

Источник: Poinsatte, K., et al., Количественная оценка нейроваскулярной защиты после повторяющегося гипоксического прекондиционирования и транзиторной окклюзии средней мозговой артерии у мышей. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео демонстрируется метод повторяющегося гипоксического прекондиционирования (RHP) путем воздействия на мышь контролируемых циклов гипоксии перед индуцированием ишемического инсульта. В эксперименте оценивается его влияние на стабильность гематоэнцефалического барьера, адаптацию нейронов и воспаление.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Повторяющаяся гипоксическая предварительная подготовка

1. : Спроектируйте по индивидуальному заказу четыре расходомера на газовых регуляторах и прикрепите их к стандартным 15-литровым индукционным камерам с трубками из поливинилхлорида (ПВХ), чтобы сжатый газ из кислородных баков (O₂) мог поступать в камеры через впускное отверстие.
2. Разделите мышей на 2 группы: группа повторяющегося гипоксического прекондиционирования (RHP), которая получает воздействие 8% и 11%_O2, и контрольная группа, которая получает воздействие 21%_O2 (комнатный воздух) одновременно.
3. Снимите верхнюю крышку фильтра каждой клетки и поместите клетку с неповрежденными бутылками с едой и водой в камеры, соединенные с соответствующими резервуарами_Ø2. Закройте и зафиксируйте крышку камеры.
   1. Откройте главный газовый клапан для баков и установите начальный расход для каждой индукционной камеры на 2 л в минуту (LPM) в течение первых 5 минут выдержки. Уменьшите расход до 1 л/мин в течение оставшейся части выдержки.
   2. По окончании выдержки уменьшите расход до 0 л/мин и закройте газовые клапаны баков.
   3. Откройте крышки камеры и установите на место верхнюю крышку фильтра на каждой клетке. Поместите клетки в стандартные корпуса до следующего гипоксического воздействия.
4. Распыляйте на каждую индукционную камеру NPD (Steris) или эквивалентное дезинфицирующее/дезодорантное средство после каждого использования.
5. Подвергайте воздействию мышей с 21% и RHP в одно и то же время суток в течение двух недель.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Расходомеры, регуляторы	VetEquip, Inc	Специальный заказ	Четыре расходомера прикреплены к гибкой трубке из ПВХ диаметром 6,0 мм, которая подключается к входному порту на каждой индукционной камере с помощью пластикового гнездового разъема. Эти расходомеры крепятся болтами к металлическому стержню размером 6,5 x 1 x 1 дюйм. Этот металлический стержень крепится болтами к манометру МИ-246-с выпускным отверстием ДИСС. Это оборудование для манометра и расходомера можно прикрепить к каждому новому газовому баллону с помощью гаечного ключа.
Бак 21% O₂ AirGas		OX USP200
11% O₂ бак	AirGas	Специальный заказ
8% O₂ бак	AirGas	Специальный заказ
15 л индукционные камеры	VetEquip	941454