Субретинальное введение вирусных векторов в пигментный эпителий сетчатки на мышиной модели

Аннотация

Источник: Park, S. W., et al. Лимбальный подход - субретинальная инъекция вирусных векторов для генной терапии пигментного эпителия сетчатки мышей. J. Vis. Exp. (2015)

В видеоролике описан метод субретинального введения вирусных векторов в пигментный эпителий сетчатки (РПЭ) на мышиной модели. В нем подробно описана процедура от анестезии и подготовки глаза до точной доставки лентивирусного вектора, обеспечивающего интеграцию и экспрессию генов в РПЭ.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Подготовка набора для инъекций и вирусных векторов

1. Подготовьте микролитровый шприц, оснащенный тупой иглой 33 г, стерилизованный с использованием газообразного этиленоксида. Разбавьте вирусные векторы в PBS (фосфатно-солевой буфер) для получения адекватного титра в микропробирке (т.е. 1 x 10⁶ TU/μl). Промойте шприц несколько раз вирусными векторами, чтобы удалить все мертвые зоны в шприце.

2. Субретинальная инъекция вирусных векторов

1. Обезболите взрослых мышей (т.е. в возрас....

Результаты

Рисунок 1. Принципиальная схема субретинальной инъекции. H&E (окрашивание гематоксилином и эозином) окрашивало поперечное сечение глаза мыши, изображающее структуры с игольчатым путем для субретинальной инъекции, отмеченным пунктирным кв.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Пинцет DUMONT #5 11см DUMOSTAR 0,1 x 0,06 мм наконечники	WPI	500233
VANNAS Ножницы S/S, 105 мм	WPI	555583S
33G Тупой иголец	WPI	NF33BL-2
Шприц NanoFil, 10 микролитров	WPI	NANOFIL
RPE-KIT	WPI	RPE-KIT	Для легкого введения одной рукой
30Gx1/2 (0,3 мм x 13 мм) BD PrecisionGlideTM Игла	BD	305107	Начальный прокол для субретинальной инъекции
Защитные очки для микроскопа (No 1 диаметр 3 мм)	Warner Instruments	64-0720 (CS-3R)
Leica операционная микроскоп	Leica	LM M80
Fluoresecein микроскоп	Nikon	Eclipse 80i
Lentivirus	Thermo scientific	TMO. LV-Ctr	Используется для разбавления векторов
PBS	Gibco	10010-015	Используется для разведения векторов
Троперин (фенилэфрин 0,5%-тропикамид 0,5%)	Hanmi		Для дилатации
Пропаракаина гидрохлорид Офтальмологический раствор USP, 0,5% (стерильный)	Bausch&Lomb		Для местной анестезии
Healon GV OVD	Abbott Medical Optics Inc.
Золетил 50 (тилетамин гипохлорид и золазепам гипохлорид)	Вирбак		Для общей анестезии
Ромпун® инъекции (Ксилазин гидрохлорид	Байер		Для общей анестезии

)