Внутримышечные инъекции по концевым пластинам двигателя для челночных индикаторов непосредственно в моторные нейроны крыс

Аннотация

Источник: Mohan, R., et al. Внутримышечные инъекции вдоль моторных концевых пластин: минимально инвазивный подход к челночному отслеживанию непосредственно в моторные нейроны. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео демонстрируется целенаправленная доставка флуоресцентного нейронного индикатора в моторные нейроны путем внутримышечной инъекции в моторные концевые пластины (MEP). В нем описываются этапы, связанные с подготовкой крысы, введением индикатора и оценкой меченых моторных нейронов на предмет нейротерапевтического потенциала.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были проверены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарной экспертной комиссией JoVE.

1. Внутримышечные инъекции в концевые пластины двигателя

1. Вытягивайте стеклянные микропипетки с помощью съемника микропипеток (рекомендуется использовать градуированные микропипетки с поршнями). С помощью препарирующего микроскопа разбейте кончики микропипеток парой щипцов таким образом, чтобы внутренний диаметр просвета микропипетки составлял примерно 0,5 мм.
2. Убедитесь, что все используемые хирургические инструменты только что аутоклавированы, а операционная область стерильна.
3. Наполните микропипетки фтор-золотом (5% в дистиллированной воде).
4. Вызвать анестезию у животного с помощью изофлурана (4% в_О2) в индукционной камере. Проверьте наличие выпрямляющего рефлекса и убедитесь в его отсутствии перед извлечением из индукционной камеры. Закрепите носовой конус над мордой крысы и введите изофлуран (2% в_О2) для поддержания анестезии. Зажмите пальцы ног животного и осторожно коснитесь глаза животного, чтобы убедиться, что как отвод педали, так и роговичные рефлексы отсутствуют.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Также можно использовать смесь кетамина и ксилазина (80 и 10 мг/кг соответственно, вводимые внутрибрюшинно). Кетамин является препаратом Списка 8 («Контролируемый»), и необходимо соблюдать необходимые протоколы, связанные с покупкой, использованием, хранением и утилизацией препарата.
5. Наносите лубрикант для глаз, чтобы предотвратить пересыхание глаз во время процедуры.
6. Выбрейте целевую конечность и с помощью марли протрите выбритый участок тремя чередующимися скрабами хлоргексидина и 70% спирта. Переведите животное в операционную зону.
7. Положите животное на чистую пеленку и расположите ее соответствующим образом, чтобы обеспечить хороший доступ к целевой мышце (мышцам).
8. С помощью щипцов с зубчатыми захватами приподнимите кожу над целевой мышцей подальше от основной мускулатуры и сделайте разрез на коже хирургическими ножницами. Убедитесь, что разрез достаточно большой, чтобы полностью обнажить интересующую мышцу (мышцы). Убедитесь, что повреждение фасции минимально
.
9. Используйте фотографии моторной торцевой пластины (MEP), чтобы мысленно перенести расположение и форму MEP-области на мышцу (мышцы).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Тонкий фломастер может помочь в воспроизведении MEP-области с фотографии на интересующую мышцу (мышцы).
10. Выполните несколько инъекций по всей длине области MEP (для Fluoro-Gold должно быть достаточно 3-4 инъекций по 1-2 мкл каждая). Аккуратно протрите мышцы, чтобы удалить просачивание.
11. Сблизьте два конца разрезанной кожи тупыми щипцами и закройте рану хирургическими зажимами. Инфильтрат 0,1 мл Бупивакаина (0,5% в воде) (или других местных анестетиков) по всему размаху раны.
12. Выключите наркозный аппарат и наблюдайте за животным до тех пор, пока оно полностью не оправится от анестезии.
13. Подождите 14 дней между введением внутримышечных инъекций и перфузией животных.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Fluoro-Gold	Fluorochrome, LLC	Nil	Разбавленный до 5%
Drummond PCR Micropipets 1-10 μl	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	в сопровождении плунжеров
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 мг/г Изофлуран ингаляционный пар
Autoclip 9 мм Wound Clips	Texas Scientific Instruments, LLC	205016