Method Article

Характеристика генетически модифицированных мезенхимальных стволовых клеток для применения в нейротерапии

August 7th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Sharma, A. D., et.al. Высокопроизводительная характеристика стволовых клеток взрослого человека, разработанных для доставки терапевтических факторов для нейропротекторных стратегий. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео демонстрируется процесс определения характеристик трансгенных мезенхимальных стволовых клеток, сконструированных для экспрессии терапевтических нейротрофических факторов. В нем описаны этапы, связанные с фиксацией, проникновением и окрашиванием клеток первичными и вторичными антителами, нацеленными на маркер пролиферации клеток, с последующим анализом с использованием системы скрининга с высоким содержанием для захвата флуоресцентных сигналов в ядрах. Повышенная экспрессия маркеров пролиферации подтверждает пригодность трансгенных клеток для применения в нейротерапии.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Ki67 Анализ пролиферации

  1. клеток Ki67 Анализ пролиферации клеток Ki67 (иммуноцитохимия)
    1. Промойте клеточные культуры буфером 0,1 М фосфата (PO4) в течение одной минуты два раза. Зафиксируйте культуру с 4% параформальдегидом (PFA) в течение 20 мин при комнатной температуре. Удалите PFA и промойте лунки PBS в течение семи минут три раза.
    2. После заключительного промывания добавьте в каждую лунку по 100 мкл раствора блокатора (фосфатный буферный раствор, 5% нормальная ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
96 луночных пластинGreiner Bio One65509096 луночных пластин, выбранных для использования в ImageXpress
Bovine serum albumin (BSA)Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури)A9647
Rabbit anti-Ki67 антителоAbcam ( Кембридж, Массачусетс)Ab166671:200 разведение
DAPIInvitrogen (Карлсбад, Калифорния)D3571
Donkey anti-Rabbit Cy3Jackson Immuno Res Lab (Вест Гроув, Пенсильвания)711-165-1521:500 разведение
мышей МСК взрослых мышей C57BL/6Tulane Cent for Gene Therapy (Новый Орлеан, Луизиана) Выделено из костного мозга
Генетически модифицированные МСК (GFP, BDNF, GDNF, BDNF/GDNF)Эти клетки были получены из нашего предыдущего исследования: Ye et. al. (в подготовке)
Нормальная ослиная сыворотка (NDS)Jackson Immuno Res Lab (West Grove, PA)017-000-121
Параформальдегид (PFA)Fisher Scientific (Hampton, NH)O40424% PFA в 0,1M PO4 буфере
Фосфатный солевой буфер (PBS)Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури)P4417
Triton X-100Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури)X100
ImageXpress MicroMolecular devices (Саннивейл, Калифорния)ImageXpress microскрининга высокого содержания
MetaXpress 4.0Molecular devices (Саннивейл, Калифорния)MetaXpress 4.0Программное обеспечение для сбора и анализа изображений
KH₂PO₄Fisher Scientific (Хэмптон, Нью-Гэмптон)P285Для буфера PO
₄ K₂HPO₄Fisher Scientific (Hampton, NH)P288Для буфера PO₄
Система

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mesenchymal Stem CellsNeurotrophic FactorsCell Proliferation AssayHigh Content ScreeningImmunofluorescence StainingKi 67 MarkerGFP ExpressionParaformaldehyde FixationSecondary AntibodiesDNA Binding Dye

Related Articles