Влияние индуцированной этанолом симпатической блокады ганглия на регенерацию нервов на собачьей модели

Аннотация

Источник: Shionoya, Y., et al. Индуцированная этанолом блокада шейного симпатического ганглия для стимуляции регенерации нижнего альвеолярного нерва у собак с использованием искусственного нерва. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео показана собачья модель регенерации нижнего альвеолярного нерва (IAN) с использованием биоразлагаемого каркаса и симпатической блокады, вызванной этанолом. Процедура включает в себя хирургический доступ к шейному симпатическому ганглию и инъекцию этанола для индуцирования вазодилатации. Возникающее в результате этого увеличение притока крови к месту повреждения в сочетании с аксональной регенерацией под контролем шванновских клеток способствует регенерации нервов.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Анестезия и подготовка кожи

1. : Обезболите собаку смесью 5 мг/кг кетамина гидрохлорида и 1 мг/кг ксилазина путем внутримышечной инъекции.
2. Интубировать с помощью трахеальной трубки диаметром 7,5 мм и длиной 25 см.
3. Расположите собаку в правильном боковом положении. Поддерживать общую анестезию с 3,2% севофлураном с кислородом (1,0 л/мин).
4. Используйте грелку для поддержания температуры тела на уровне 37 °C.
5. Нанесите офтальмологический гель на переднюю поверхность глаз, чтобы избежать истирания роговицы.
6. Тщательно выбрейте операционное поле (левую сторону грудной клетки) с помощью хирургических машинок для стрижки. Распылите значительное количество спиртового раствора на операционное место. Подождите не менее 15 секунд. Повторите нанесение 3 раза.
7. Записывайте частоту сердечных сокращений и сатурацию кислорода во время операции.

2. Реконструкция нижнего альвеолярного нерва с использованием трубки с коллагеном полигликолевой кислоты (PGA-C): разработка модели, предназначенной только для реконструкции:

1. введите 3 мл 1% лидокаина с помощью иглы 27 G в левую десну нижней челюсти в качестве местного анестетика и анальгетика.
2. Выполните 5-сантиметровый поперечный разрез лезвием скальпеля номер 15 в левой нижней десне, чтобы обнажить нижнюю челюсть животного.
3. С помощью пьезоэлектрических ультразвуковых колебаний измельчите проксимальную часть нижней челюсти в прямоугольник размером 3 см × 8 мм через заднее подбородочное отверстие.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Частота вибрации составляла 28–32 кГц.
4. Удалите лобную часть нижней челюстной костной пластины (размеры 3 см × 8 мм) для обнажения левого ИАН (рис. 1А).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Место реконструкции соответствует верхушке корня первого моляра
5. Пересеките ЯИ с помощью скальпеля для удаления 10-мм сегмента.
6. Вставить проксимальную и дистальную культи отрезанного нерва в нервную трубку на глубину до 2 мм.
7. Используйте 8-0 нейлоновые швы и хирургический микроскоп с 8-кратным увеличением для пришивания трубки к проксимальному и дистальному концам нерва (рис. 1B).
8. Верните костную пластину на исходное место в нижней челюсти.
9. Закройте рану капроновыми швами 4-0
.
10. Через день после операции подтвердите, что пластина нижней челюсти находится в правильном положении.
    1. 4.10.1 Выполните компьютерную томографию (КТ) лицевой кости под анестезией. Установите следующие параметры ТТ: 120 кВпик, 200 мАс, 0,5 мм/с, толщина среза 0,5 мм.
       1. Введите анестезию с использованием смеси 5 мг/кг кетамина гидрохлорида и 1 мг/кг ксилазина (Рисунок 2).
11. Применяйте ампициллин (100 мг/сут) в качестве антибиотика и ацетаминофен (100 мг/сут) в качестве анальгетика в течение недели после операции.

3. Вызванная этанолом блокада шейного симпатического ганглия (CSGB): разработка модели Reconstruction + CSGB

1. Выполните реконструкцию IAN, как описано в разделе 2, и дайте неделю на восстановление.
2. Обезболить животное 1,5% севофлураном в кислороде (4 л/мин) и воздухе (6 л/мин). Побрейте и очистите предполагаемое операционное поле, как описано в разделе 3.
3. Отметьте линию разреза хирургическим маркером для кожи, проведя линию на области груди с левой стороны (рисунок 3, линия разреза имеет длину 20 см).
4. Введите 5 мл 1% лидокаина с помощью иглы 21 G в левую боковую область грудной клетки в качестве местного анестетика и анальгетика.
5. Надрежьте левую сторону кожи груди лезвием скальпеля под номером 10.
6. Надрежьте жировой слой электрическим скальпелем, чтобы обнажить мышечную фасцию.
7. Обнажите зубчатую вентральную мышцу и лестничную мышцу.
8. Поднимите зубчатую брюшную мышцу и лестничную мышцу от вентрального к дорсальному, чтобы обнажить второе и третье ребра (Рисунок 4).
9. Выполните левостороннюю торакотомию во втором и третьем межреберье, чтобы обнажить левый шейный симпатический ганглий (Рисунок 5).
10. Введите 0,2 мл 99,5% этанола в шейный симпатический ганглий с помощью иглы 30 G под прямой визуализацией (рис. 6).
11. Закройте межреберье прерывистыми 1-0 рассасывающимися стежками.
12. Закройте кожу прерывистыми 3-0 капроновыми стежками.
13. Применяйте ампициллин (100 мг/сут) в качестве антибиотика и ацетаминофен (100 мг/сут) в качестве анальгетика в течение недели после операции.
14. Через 1 неделю после ХГБ измерьте температуру кожи лица с помощью инфракрасной термографии, чтобы подтвердить ХГБ.

Результаты

Рисунок 1: Левый нижний альвеолярный нерв (IAN) до и после реконструкции. A) Изображение левого нижнего альвеолярного нерва (IAN) до и после реконструкции. A) Изображение левого левого IAN до реконструкции после обнажения удале...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Хирургические машинки для стрижки	Roboz Surgical Instrument Company	RC-5903
Одноразовый скальпель (No.15)	Kai medical	219ABBZX00073000
VarioSurg3	Nakanishi	VS3-LED-HPSC, E1133	Пьезоэлектрическая хирургия для обработки костей
4-0 нейлоновые шовные материалы	Ethicon	8881H
8-0 нейлоновые шовные материалы	Ethicon	2775G
Изепамицина сульфат	Nichi-Iko	620005641
одноразовый скальпель (No10)	Kai medical	219ABBZX00073000
игла 30-го калибра	Nipro	1134
1-0 рассасывающихся стежков	Ethicon	J347H
3-0 нейлоновых стежков	Ethicon	8872H
Neo Thermo	NEC Avio	TVS-700	Инфракрасная термография