$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Примечание по подготовке животных
: Животные, которые должны получить легкую травму, нуждаются в адаптации в темноте в ночь перед отдаленной ишемией. Животные, подвергшиеся легким повреждениям, нуждаются в выращивании в темноте (12 часов свет: темный цикл, 5 люкс)
- Проводите дистанционную ишемию у бодрствующих или обезболенных грызунов. Следите за тем, чтобы животные имели здоровый мышечный тонус. Обеспечьте это, ущипнув верхнюю заднюю конечность, чтобы убедиться в наличии достаточного количества мышц. Индуцированная RIP защита от легких травм была протестирована на сидячих крысах в возрасте до 6 месяцев.
- Анестезированный препарат для дистанционного ишемического прекондиционирования (RIP)
- Вводите крысам внутрибрюшинную инъекцию 60 мг/кг кетамина и 5 мг/кг ксилазина. Проверьте глубину анестезии, вытянув ногу и защипнув кожу на нижней стороне стопы. У животного отсутствует рефлекс, если оно находится под глубоким наркозом. Применяйте искусственные слезы, чтобы избежать сухости роговицы во время анестезии.
- Поместите крыс на грелку или трубку водонагревателя, чтобы поддерживать постоянную температуру тела на уровне 37,5 °C. Расположите крысу в положении лежа подушечками нижних конечностей вверх. Удаленной ишемии может подвергаться как правая, так и левая конечность.
2. Применение датчика температуры кожи
:
- Вытяните ногу крысы, которая должна подвергнуться ишемии, и поместите зонд для кожи на подушечку ноги. Расположите датчик кожи так, чтобы обеспечить максимальный контакт между датчиком температуры и кожей. Плотно вставьте щуп в подножку и прикрепите щуп бумажной лентой.
- Проверьте расположение кожного зонда, отслеживая температуру в программном обеспечении для регистрации температуры. Следите за тем, чтобы температура кожи находилась в пределах 30-34 °C и оставалась стабильной. Следите за температурой кожи в течение 1-2 минут. Отрегулируйте кожный зонд, если температура нестабильна или ниже 30 °C.
3. Дистанционная ишемия
- Сдуйте манжету и убедитесь, что клапан давления воздуха закрыт. Вытяните ногу и свободно обхватите манжету на верхней задней конечности. Указательным и большим пальцами вытяните ногу, а нижние пальцы пальцев удерживают ослабленную манжету в нужном положении.
- Увеличьте давление в манжете животного, находящегося под наркозом, до 160 мм рт.ст., а у бодрствующих животных увеличьте давление в манжете до 180 мм рт.ст.
Примечание: Артериальное давление под наркозом у крыс колеблется в пределах 120-140 мм рт.ст. и повышается до 160 мм рт.ст. в сознании. Запустите таймер и запись температуры ног, как только будет достигнуто правильное давление.
Примечание: Температура ног должна упасть на 2 °C после 5 минут постоянного давления. - Сохраняйте положение манжеты над «коленом» животного на протяжении всей ишемии. Давление манжеты начнет падать через несколько минут или если конечность крысы начнет двигаться.
- Многократно накачивайте лампочку накачивания короткими порциями для поддержания желаемого давления в манжете Повторяющиеся короткие всплески накачивания
- Дистанционная ишемия может доставляться непрерывно в течение от 5 до 15 минут. Протокол ишемической реперфузии включает 2 периода ишемии по 5 минут с промежуточной 5-минутной реперфузией.
- Сдуйте давление манжеты, ослабив клапан давления воздуха. Проверяйте изменение температуры в течение протокола ишемии. Отпустите манжету.
- Продолжайте экспериментировать с травмами. Животных под действием наркоза нужно будет поместить на грелку. Продолжайте наблюдение за животными до амбулаторного состояния. Животных нельзя возвращать в жилье до тех пор, пока они не выгулятся.