Создание системы переносчиков экзосом, загруженной дофамином

Аннотация

Источник: Yavuz, B., et al. Формулирование и характеристика системы переносчиков дофамина на основе экзосом. J. Vis. Exp. (2022)

В этом видео демонстрируется формула экзосом, загруженных дофамином, с акцентом на сапонин-индуцированную мембранную пермеабилизацию для усиления инкапсуляции дофамина в экзосомах.

Протокол

1. Загрузка дофамина в экзосомы

ПРИМЕЧАНИЕ: После того, как была завершена характеристика экзосом мезенхимальных стволовых клеток Wharton's Jelly (WJ-MSCs), были получены экзосомы, загруженные дофамином, в качестве системы доставки лекарств. Загрузка препарата в экзосомы осуществляется методом инкубации.

1. Добавьте в экзосомную суспензию 3 мл фосфатно-солевого буфера (PBS). Разбавленную суспензию стерилизуют путем фильтрации с использованием фильтров 0,22 мкм. Перенесите 500 мкл стерилизованной суспензии экзосом в другую пробирку.
2. Приготовьте раствор дофамина (0,5 мг/мл) с дистиллированной водой. Добавьте 500 мкл раствора дофамина в пробирки, содержащие экзосомы.
3. Добавьте сапонин в суспензию на шаге 1.2. Приготовленную экзосомно-дофаминовую суспензию инкубировать в течение 24 ч при 37 °С. ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрация сапонина не должна превышать 0,002% от общего раствора.
4. Ультрацентрифугирование суспензии при 90 000 × г в течение 70 мин для удаления свободного дофамина и сапонина из среды. Храните выделенные экзосомы при температуре -20 °C до использования для дальнейшего анализа. заметка: Добавьте 0,02% аскорбиновую кислоту для стабилизации приготовленного раствора дофамина.

Материалы