В этом видео демонстрируется формула экзосом, загруженных дофамином, с акцентом на сапонин-индуцированную мембранную пермеабилизацию для усиления инкапсуляции дофамина в экзосомах.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание системы переносчиков экзосом, загруженной дофамином
675 просмотров
⸱
7 августа 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Загрузка дофамина в экзосомы
ПРИМЕЧАНИЕ: После того, как была завершена характеристика экзосом мезенхимальных стволовых клеток Wharton's Jelly (WJ-MSCs), были получены экзосомы, загруженные дофамином, в качестве системы доставки лекарств. Загрузка препарата в экзосомы осуществляется методом инкубации.
- Добавьте в экзосомную суспензию 3 мл фосфатно-солевого буфера (PBS). Разбавленную суспензию стерилизуют путем фильтрации с использованием фильтров 0,22 мкм. Перенесите 500 мкл стерилизованной суспензии экзосом в другую пробирку.
- Приготовьте раствор дофамина (0,5 мг/мл) с дистиллированной водой. Добавьте 500 мкл раствора дофамина в пробирки, содержащие экзосомы.
- Добавьте сапонин в суспензию на шаге 1.2. Приготовленную экзосомно-дофаминовую суспензию инкубировать в течение 24 ч при 37 °С. ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрация сапонина не должна превышать 0,002% от общего раствора.
- Ультрацентрифугирование суспензии при 90 000 × г в течение 70 мин для удаления свободного дофамина и сапонина из среды. Храните выделенные экзосомы при температуре -20 °C до использования для дальнейшего анализа. заметка: Добавьте 0,02% аскорбиновую кислоту для стабилизации приготовленного раствора дофамина.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,22 мкм мембранный фильтр | Aisimo | Используется для процесса стерилизации | |
| 15 мл Falcon tube | Nest | Используется на этапе клеточной культуры | |
| 50 мл Falcon tube | Nest | Используется в клетке стадия культивирования | |
| Центробежная | Hitachi | CF16RN | Используется на стадии выделения экзосом |
| Дофамина гидрохлорид H8502-10G | Sigma | H8502-10G | Используется при загрузке экзосомами дофамином |
| Optima XPN-100 Ультрацентрифуга | Beckman Coulter | Используется на стадии выделения экзосом: таблетка | |
| PBS | Biomatik | 43602 | При приготовлении раствора PBS |
| Сапонин | Sigma | 47036-50G-F | Его использовали путем добавления его к общему раствору в процессе загрузки экзосомами дофамина. |
| Мезенхимальные стволовые клетки желе Уортона | ATCC |
