Оценка нейропротекторных эффектов тестируемого соединения на мышиной модели окклюзии средней мозговой артерии

Аннотация

Источник: Lee, S. E., et al. Оценка нейропротекторных эффектов экстракта Glycyrrhizae radix et rhizoma на мышиной модели транзиторной окклюзии средней мозговой артерии. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео показана процедура оценки нейропротекторного эффекта тестируемого соединения на мышиной модели окклюзии средней мозговой артерии. Соединение проникает в мозг, предотвращает гибель нейронов и уменьшает объем инфаркта, подтверждая его нейропротекторный эффект по сравнению с необработанной мышью.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Мышиная модель окклюзии средней мозговой артерии (MCAO)

1. Используйте самцов мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель и весом 22-25 г. Обеспечьте всем животным свободный доступ к стандартному корму и воде и разместите их в среде с контролируемой температурой (22 ±1°C) и 12-часовым циклом света/темноты.
   1. Разделите мышей на группы по шесть мышей в каждой, которые должны состоять из фиктивных нормальных, контрольных групп и групп лечения Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
   2. Операции MCAO на контрольной и GRex группах лечения с использованием стереомикроскопа.
2. Индуцировать ингаляционную анестезию у мышей с использованием 2% изофлурана в 70% закиси азота (N₂O) и 30% кислорода (O₂). Анестезия считается достаточной, когда мышь перестает реагировать на механический раздражитель, приложенный к ее хвосту. Поддерживайте температуру тела мышей на уровне 36,5 ± 0,5 °C с помощью одеяла, поддерживающего температуру тела, подключенного к термометру.
3. Удалите все волосы на груди и шее мышей путем бритья с последующим использованием крема для эпиляции. Продезинфицируйте хирургическое место кожи бетадиновым скрабом, дважды чередуя его со спиртом, а затем сделайте разрез длиной примерно 2 см хирургическим лезвием в центре шеи. Тщательно изолируйте левую общую сонную артерию (ЛХКА), наружную сонную артерию и ветвь внутренней сонной артерии от окружающих соединительных тканей.
4. Перевязать наружную сонную артерию и общую сонную артерию хирургическим швом (шелковый шов 4-0, полуузел) для временного блокирования кровотока во внутренней сонной артерии во время операции.
5. Вставьте нейлоновый шов с силиконовым покрытием (монофиламент 8-0, длина 11 мм) через внутреннюю сонную артерию к началу левой МКА. Отрегулируйте толщину части нити с силиконовым покрытием в диапазоне 0,10-0,12 мм.
6. Измерьте снижение относительного мозгового кровотока (рКБФ) в МКА с помощью лазерного допплеровского флоуметра. MCAO будет подтвержден при поддержании rCBF на уровне < 20% от значений состояния покоя в течение всего ишемического периода.
7. Зафиксируйте введенную нить к кровеносному сосуду на 2 часа, пока мозговая артерия окклюзирована, а затем осторожно извлеките нить для восстановления кровотока в течение 22 часов реперфузии. Зашить кожу путем швов в пяти местах (3-0 шелковый шов, два полузацепных узла) и дать каждой мыши проснуться от наркоза.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma	Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Корея
Стереомикроскоп	Leica	M50
Стереомикроскоп	Nikon	SMZ745
Лазерный доплер	Мур Инструмент	moorVMS-LDF
Анестезиологический настольный кронштейн с системой расходомера N₂O и O₂	Harvard Appratus	34-1352
Система гомеотермического мониторинга	Harvard Appratus	55-7020
Мышиная диета	Doo Yeol Biotech	Стандарт для грызунов
Isoflurane	JOONGWAE	A02104781
Isoflurane	TROIKAA	ISOTROY 100
Шелковый шов (4-0 черный шелк)	AILEE	SK47510
Шелковый шовный материал (3-0 белый шелк)	Baekjae	57
Нейлоновый шовный материал (8-0 мононить)	AILEE	NB825
Щипцы	Fine Science Tools	11241-30
Щипцы	Fine Science Tools	11254-20
Щипцы	Fine Science Tools	11260-20
Тонкие щипцы	Fine Science Tools	11274-20
Хирургические ножницы	Fine Science Tools	14001-12
Extra fine Bonn ножницы	Fine Science Tools	14084-08
Moria Pascheff-Wolff пружинные ножницы	Fine Science Tools	15371-92
Щипцы для расширения сосудов	Fine Science Tools	18153-11