$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Мышиная модель окклюзии средней мозговой артерии (MCAO)
- Используйте самцов мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель и весом 22-25 г. Обеспечьте всем животным свободный доступ к стандартному корму и воде и разместите их в среде с контролируемой температурой (22 ±1°C) и 12-часовым циклом света/темноты.
- Разделите мышей на группы по шесть мышей в каждой, которые должны состоять из фиктивных нормальных, контрольных групп и групп лечения Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
- Операции MCAO на контрольной и GRex группах лечения с использованием стереомикроскопа.
- Индуцировать ингаляционную анестезию у мышей с использованием 2% изофлурана в 70% закиси азота (N₂O) и 30% кислорода (O₂). Анестезия считается достаточной, когда мышь перестает реагировать на механический раздражитель, приложенный к ее хвосту. Поддерживайте температуру тела мышей на уровне 36,5 ± 0,5 °C с помощью одеяла, поддерживающего температуру тела, подключенного к термометру.
- Удалите все волосы на груди и шее мышей путем бритья с последующим использованием крема для эпиляции. Продезинфицируйте хирургическое место кожи бетадиновым скрабом, дважды чередуя его со спиртом, а затем сделайте разрез длиной примерно 2 см хирургическим лезвием в центре шеи. Тщательно изолируйте левую общую сонную артерию (ЛХКА), наружную сонную артерию и ветвь внутренней сонной артерии от окружающих соединительных тканей.
- Перевязать наружную сонную артерию и общую сонную артерию хирургическим швом (шелковый шов 4-0, полуузел) для временного блокирования кровотока во внутренней сонной артерии во время операции.
- Вставьте нейлоновый шов с силиконовым покрытием (монофиламент 8-0, длина 11 мм) через внутреннюю сонную артерию к началу левой МКА. Отрегулируйте толщину части нити с силиконовым покрытием в диапазоне 0,10-0,12 мм.
- Измерьте снижение относительного мозгового кровотока (рКБФ) в МКА с помощью лазерного допплеровского флоуметра. MCAO будет подтвержден при поддержании rCBF на уровне < 20% от значений состояния покоя в течение всего ишемического периода.
- Зафиксируйте введенную нить к кровеносному сосуду на 2 часа, пока мозговая артерия окклюзирована, а затем осторожно извлеките нить для восстановления кровотока в течение 22 часов реперфузии. Зашить кожу путем швов в пяти местах (3-0 шелковый шов, два полузацепных узла) и дать каждой мыши проснуться от наркоза.