Индуцирование острого электросудорожного припадка у модели крысы

Аннотация

Источник: Jang, S., et al, Electroconvulsive Seizures in Rats and Fractionation of Their Hippocampi To Study Induced Dual Changes in Postsynaptic Density Proteins. J. Vis. Exp. (2017)

В этом видео демонстрируется индукция острого электросудорожного припадка (ЭКС) на модели крысы для изучения нейропластичности, вызванной припадком. Исследователи применяют электрическую стимуляцию с помощью электродов с ушными зажимами, вызывая гипервозбудимость нейронов и клонус. Эта модель помогает исследовать синаптическую пластичность, механизмы судорог и терапевтические эффекты, связанные с электросудорожной терапией (ЭСТ).

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Индукция острой ЭКС

ПРИМЕЧАНИЕ: Смотрите рисунок 1B, верхняя панель.

1. Смочите ушные зажимы стерильным физиологическим раствором и убедитесь, что они пропитаны.
2. Смочите уши крысы стерильным физиологическим раствором, завернув их в марлю, пропитанную солевым раствором. Как только они намокнут, снимите марлю.
3. Прикрепите по одному зажиму к каждому уху и расположите за пределами основной хрящевой ленты.
4. Подтвердите на компьютере ECS, что установлен истинный цикл; если нет, на аппарате появится сообщение об ошибке или показания «1».
5. Наденьте толстую неметаллическую перчатку. Осторожно держа крысу в руке в перчатке, нажмите кнопку «ШОК» на несколько секунд и медленно отпустите хватку крысы, чтобы наблюдать за припадком. Для фиктивного контроля «без припадка» (NS) обращайтесь с крысой одинаково, но не подавайте ток.
6. Отсоедините ушные зажимы в момент начала клонуса и запишите судорожное поведение в соответствии с пересмотренной шкалой Расина, которая включает в себя «движения рта и лица» (стадия 1), «кивок головой» (стадия 2), «клонус передней конечности» (стадия 3), «вставание на дыбы с клонусом передней конечности» (стадия 4) и «вставание на дыбы и падение с клонусом передней конечности» (стадия 5). Припадок должен длиться около 10 с; Запишите продолжительность припадка с помощью таймера.
7. После прекращения припадка верните крысу в ее домашнюю клетку. Понаблюдайте за крысой еще 5 минут, чтобы убедиться в выздоровлении крысы от судорог. Держите его поодиночке в клетке и верните клетку в послеоперационную палату.
8. Повторите индукцию ЭКС на следующей крысе.
9. Наблюдайте за крысами в течение оставшейся части дня и, по крайней мере, один раз утром и один раз во второй половине дня на следующий день, пока они не будут усыплены для экспериментов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Метод индукции ЭКС может привести к клиническим признакам в качестве случайного побочного эффекта, требующего внимания. Например, протокол индукции ЭКС может вызвать судороги, которые длятся дольше 15 с и вызывают ненужный стресс у крыс. В этом случае прекратите приступ с помощью диазепама (10 мг/кг, в/в) или пентобарбитала (25 - 30 мг/кг, в/в). Если у крыс развивается респираторный дистресс или серьезные поведенческие аномалии после прекращения припадков, усыпьте их путем вдыхания углекислого газа с последующей обезглавливанием.

Результаты

Рисунок 1: Схема для индукции острой и хронической ЭКС. (А) Крысу подключали к генератору импульсов с помощью электродов-ушных зажимов и применяли электрический разряд (55 мА, 100 импульсов/с в течение 0,5 с) для вызова тони...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Sprague-Dawley rat	Charles River Laboratories		ECS поставляет
генератор импульсов	Ugo Bsile, Комерио, Италия	57800	ECS поставляет