Протоколы для Вагинальные Прививка и сбора проб в экспериментальной модели мышей Candida Вагинит

Краткое содержание

Основные методы, используемые в оценке Candida Вагинита в экспериментальной животной модели описаны. Методы позволят быстрый сбор образцов вагинального и лимфоцитов из слив поясничных лимфатических узлов. Эти методы могут привести к мышиных моделях других заболеваний в женской нижних половых путей.

Аннотация

Вульвовагинального кандидоза (ВВЦ), вызванного видами Candida, является грибковой инфекцией нижних половых путей женщины, которая затрагивает около 75% здоровых женщин в течение репродуктивного возраста ^18,32-34. Предрасполагающие факторы включают антибиотик использования, неконтролируемого диабета и нарушение репродуктивных гормонов в связи с беременностью, оральных контрацептивов или гормональной терапии ^33,34. Периодические ВВЦ (RVVC), определяется как три и более эпизодов в год, влияет на отдельном от 5 до 8% женщин, не имеющих предрасполагающие факторы ^33.

Экспериментальной модели мышей ВВЦ была создана и используется для изучения патогенеза и слизистых ответ принимающей Candida ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37.} Эта модель также была использована для испытаний потенциальной противогрибковое лечение в естественных условиях ^13,24. Модель предполагает, что животные содержаться в состоянии выбрать для pseudoestrusimal Candida колонизации / инфекции ^6,14,23. В таких условиях, затравленных животных будет обнаружено вагинальных грибковых нагрузку на несколько недель или месяцев. Прошлые исследования показывают чрезвычайно высокую параллель между моделью человека и животных инфекция относительно иммунологических и физиологических свойств ^3,16,21. Различия, однако, в том числе отсутствие Candida в качестве нормальной влагалищной флоры и нейтральный рН влагалища у мышей.

Здесь мы демонстрируем ряд ключевых методов в модели вагинит мыши, которые включают вагинальные прививки, быстрый сбор образцов вагинального, оценка вагинальных грибковых бремя, и тканевые препараты для сотовых добычи / изоляции. Далее следуют представитель результаты для трехсторонних промывания влагалища жидкости, грибковые бремя, и осушения лимфатических узлов дает лейкоцитов. При использовании анестетиков, промывание образцы могут быть собраны в нескольких точках времени на тех же мышей для продольной оценкиинфекции / колонизации. Кроме того, эта модель не требует иммуносупрессивных препаратов для инфицирования, что позволяет иммунологических исследований при определенных условиях хозяина. Наконец, модель и каждая техника введенные здесь, может привести к использованию методологии для изучения других инфекционных заболеваний нижних женских половых путей (бактериальные, паразитарные, вирусные) и соответствующего местного или системного защиту хозяина.

Протокол

1. Вагинальные инокуляции Candida Albicans

1. За три дня до прививки, в то время как сдерживающее животных подвергать живот, вводят 100 мкл кунжутное масло, содержащее 0,1-0,5 мг β-эстрадиола подкожно в нижнюю часть живота. Advance иглу от 5 до 10 мм сбоку от кожи, чтобы минимизировать утечки из места инъекции.
   Подкожного введения эстрогена в нижней части живота является оптимальным в данной модели из-за непосредственной близости от половых путей. Эффективные дозы могут различаться в зависимости от штамма мыши, возраст или эстроген производных. В предыдущих исследованиях с использованием CBA-J (H-2 ^κ), C3H/HeN (H-2 ^κ....

Обсуждение

Экспериментальной модели мышей Candida вагинит был создан и исторически использовались в течение последних нескольких десятилетий исследования слизистой оболочки ответ принимающей Candida, а также для тестирования противогрибковое лечение ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} Протоколы, представленные здесь включать эффективные и менее трудоемкие методы, и, кажется, одна из самых оптимизированная модель системы Candida вагинит описанных на сегодняшний день. Эти методы позволяют быстро ко.......

Материалы

Название реагента	Компания	Номер по каталогу	Комментарии
Женский CBA / J мышей	Charles River лаборатории	01C38	5-6 недельного возраста
Candida Albicans (3153A)	Национальная коллекция патогенных грибов, Великобритания	NCPF3153
Кунжутное масло	Sigma-Aldrich	S3547	Не нужно предварительно стерилизовать перед использованием
Β-эстрадиол 17-валерат	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5 мг в кунжутное масло
Phytone пептон	Becton Dickinson	211906	Дополнение с 0,1% глюкозы
Трипановый синий раствор	Sigma-Aldrich	T8154
Сабуро агар декстрозы	Becton ДикИнсон	211584
Коллагеназы типа IV	Sigma-Aldrich	C5138	0,25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1,7 Ед / мл
Сетка экраны	TWP	060X060S0065W36T	№ 60 сетки из нержавеющей
Сбалансированный солевой Хэнкса решение	Invitrogen	24020-117
CytoPrep фиксатором	Fisher Scientific	12-570-10	Сохраняет мазка слайды
Папаниколау пятно EA-65	EMD Химические вещества	7054X-85
Папаниколау пятно OG-6	EMD Химические вещества	7052X-85
Квасцы Харриса гематоксилин	EMD Химические вещества	638A-85
Изофлюрана	Baxter Healthcare	НДЦ 10019-773-60	Используется с изофлуран испаритель или в капельной системой закрытой камере анестезии