Поверхностные мышей хирургии лимфатических узлов

Summary

Чтобы проследить прогрессирование иммунного ответа с течением времени в той же мыши, лимфатические узлы могут быть последовательно удалены хирургическим путем. Здесь мы опишем, как эта техника может быть выполнена.

Abstract

В области иммунологии, чтобы понять, прогрессирование иммунного ответа на вакцину, инфекции или опухоли, ответ часто сопровождается с течением времени. Кроме того, исследование лимфоцитов гомеостаза требует экспериментов время курса. Выполнение этих работ в том же мышь идеально подходит для уменьшения экспериментальной изменчивости, а также количество мышей использовали. Забора крови позволяет проводить эксперименты время, конечно, но это только дает информацию о циркулирующих лимфоцитов и предоставляет ограниченное количество ячеек ^1-4. Так как лимфоциты циркулируют по всему телу и проживающих в лимфатические узлы имеют различные свойства, важно изучить обоих местах. Последовательное удаление лимфатических узлов хирургическим путем предоставляет уникальную возможность следить за иммунный ответ или иммунной расширения ячейки в той же мыши с течением времени. Кроме того, этот метод дает от 1-2х10 ⁶ клеток в лимфатических узлах, достаточное для пеrform фенотипические характеристики и / или функционального анализа. Последовательные операции лимфатических узлов или лимфаденэктомия была успешно использована нами и другими ^5-11. Здесь мы опишем, как плечевой и паховые лимфатические узлы могут быть удалены, сделав небольшой разрез в коже anesthetised мыши. Поскольку операция является поверхностным и сделать быстро, мыши восстанавливается очень быстро, заживает хорошо и не испытывает чрезмерную боль. Каждый второй день, можно собрать один или два лимфатических узлов позволяет эксперименты время курса. Этот метод, таким образом, подходящим для изучения характеристик лимфатических узлов, проживающих лимфоцитов с течением времени. Такой подход годится для различных экспериментальных проектов и мы считаем, что многие лаборатории выиграют от выполнения последовательных операций лимфатических узлов.

Protocol

1. Подготовка перед операцией

Мыши были обработаны в соответствии с Канадским советом по руководящим принципам Animal Care.

1. Anesthetise мышам инъекции кетамина / ксилазина (150/300 мг / кг, внутрибрюшинно) или при вдыхании ИФ (2%, 1 л кислорода). Если возможно, ИФ следует использовать, поскольку оно позволяет лучше контролировать анестезии времени и глубины. Кроме того, кислород вводится в то же время, поддерживает физиологические функции животных. Кроме того, ИФ непосредственно устранить легкие и, следовательно, не требует печени или почек метаболизм.
2. Вводите бупренорфин (0,05 - 0,1 мг / кг, подкожно) или другой анал....

Discussion

Мы описали протокол Л.Н. операции, которые могут применяться в отношении многих экспериментальных систем. Хотя очень полезно следовать иммунный ответ или иммунного гомеостаза клетки, этот метод имеет ряд ограничений. Во-первых, только четыре LNS могут быть собраны. Во-вторых, иммунный ответ должен быть изучен системным или происходят в поверхностных паховых или плечевой (кожа-слив) LNS. Наконец, число клеток, полученных зависит от качества Л.Н. удаления, технические ограничения, которые могут способствовать эксперимента.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Реагент Имя	Компания	Номер в каталоге	Комментарии
Грефе пинцет изобразительных премиум шаблон	Гарвардский аппарата	52-2144	Сильно изогнутый, 10 см (4 дюйма), 0,8 мм наконечником
Мишель клип Применение и удаление щипцы	Гарвардский аппарата	52-3779	12,5 см (5 дюймов)
Мишель клипов 100	Гарвардский аппарата	52-3746	7.5-1.75 мм
Temgesic (бупренорфина гидрохлорид)	Schering-Plough
Vetalar (кетамина гидрохлорид)	Boniche животных здравоохранения		DIN: 01989529
Rompun (Ксилазин)	Bayer		DIN: 02169592
Изофлюран	ABBOTT		DIN: 02032384
Hypotears глазной мази	Novartis Ophtalmics		DIN: 02133288
Baxedin (Clorhexidine глюконат 2% изопропиловый спирт 70%)	Омега	L0000017	DIN: 02251477