Построение коллагена Гидрогель для доставки стволовых клеток, загруженных Хитозан микросфер

Краткое содержание

Главным препятствием в текущем лечения стволовыми клетками заключается в определении наиболее эффективных методов для достижения этих клеток в ткани хозяина. Здесь мы описываем на основе хитозана способ доставки, что является эффективным и простым в подходах, позволяя при этом жировых стволовых клеток для поддержания их multipotency.

Аннотация

Мультипотентных стволовых клеток было показано, что чрезвычайно полезно в области регенеративной медицины ^1-3. Тем не менее, для того, чтобы использовать эти клетки эффективно для регенерации тканей, число переменных должны быть приняты во внимание. Эти переменные включают в себя: общий объем и площадь поверхности имплантации сайта, механические свойства ткани и ткани микросреда, которая включает в себя сумму васкуляризации и компоненты внеклеточного матрикса. Таким образом, материалов, которые используются, чтобы предоставить эти клетки должны быть биологически совместимыми с определенным химическим составом при сохранении механической прочности, который имитирует ткани хозяина. Эти материалы также должны быть проницаемы для кислорода и питательных веществ для обеспечения благоприятной микросреды для клеток приложить и размножаться. Хитозан, катионный полисахарид с отличной биосовместимости, может быть легко химически модифицированных и обладает высоким сродством связываться с Mac в естественных условияхromolecules ^4-5. Хитозан имитирует гликозаминогликана часть внеклеточного матрикса, что позволяет ему функционировать в качестве субстрата для клеточной адгезии, миграции и пролиферации. В этом исследовании мы используем хитозана в виде микросфер для доставки жировых производных стволовых клеток (АОК) в коллагена основаны трехмерных леса ^6. Идеальная клетка-микросфер соотношение определяется по времени инкубации и плотности клеток для достижения максимального числа клеток, которые могут быть загружены. Как только ASC высевают на микросферы хитозана (CSM), они встроены в коллаген леса и может сохраняться в культуре в течение длительного периода времени. Таким образом, данное исследование представляет собой метод точно доставить стволовые клетки в трехмерном биоматериала эшафот.

Протокол

1. Изоляция жировой производные стволовые клетки (ASC)

Примечание: Все процедуры были выполнены при комнатной температуре, если не указано иное.

1. Изолировать крысы паранефральная и придатка жировой и промыть буферной соли стерильной Хэнка решение (HBSS), содержащей 1% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), как описано выше ^6.
2. Фарш ткани и передавать 1-2 г на 25 мл HBSS, содержащим 1% FBS в 50 мл трубку и центрифуги в 500 г в течение 8 минут при комнатной температуре.
3. Соберите свободно плавающего слоя жировой ткани и передачи до 125 мл колбу Эрленмейера и лечение с 25 мл коллагеназ....

Обсуждение

Главным препятствием в стволовой клеточной терапии разрабатывает эффективные методы для доставки клеток к указанной области для ремонта. В связи с пациента к пациенту изменчивости, тип ткани, размер повреждений и глубины; методика доставки стволовых клеток должны определяться в каждом конкретном случае на индивидуальной основе. Хотя вложения стволовых клеток в матрице и доставки их в раны, кажется, следующий логический подход к тканевой инженерии, некоторые технические трудности остаются. Это включает в себя способность.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Название реагента / оборудование	Компания	Номер по каталогу	Комментарии
Хэнкс BalancedSalt Решение (HBSS)	Гибко	14175	Потребляемый
Эмбриональной телячьей сыворотки	Hyclone	SH30071.03	Потребляемый
Коллагеназы II типа	Sigma-Aldrich	C6685	Потребляемый
70-мкм нейлоновая сетка фильтра	BD Biosciences	352350	Потребляемый
100 мкм нейлоновая сетка фильтра	BD Biosciences	352360	Потребляемый
MesenPRO рост средней система	Invitrogen	12746-012	Потребляемый
L-глютамин	Гибко	25030	Потребляемый
T75 тканевой культуры колбу	BD Biosciences	137787	Потребляемый
Хитозан	Sigma-Aldrich	448869	Потребляемый
Уксусная кислота	Sigma-Aldrich	320099	Потребляемый
Октаноле	Acros Organics	150630025	Потребляемый
Сорбитан-моноолеат	Sigma-Aldrich	S6760	Потребляемый
Гидроксид калия	Sigma-Aldrich	P1767	Потребляемый
Ацетон	Fisher Scientific	L-4859	Потребляемый
Этанол	Sigma-Aldrich	270741	Потребляемый
Тринитро бензолсульфокислота	Sigma-Aldrich	P2297	Потребляемый
Соляная кислота	Sigma-Aldrich	320331	Потребляемый
Этиловый эфир	Sigma-Aldrich	472-484	Потребляемый
8 мкм ткани Вставки культуры плиты	BD Biosciences	353097	Потребляемый
1,5 мл Трубы Микроцентрифуга	Рыбак	05-408-129	Потребляемый
МТТ реагентов	Invitrogen	M6494	Потребляемый
Диметилсульфоксида	Sigma-Aldrich	D8779	Потребляемый
Qtracker мечения клеток Kit (Q трекер 655)	Молекулярные зонды	Q2502PMP	Потребляемый
Коллаген типа 1	Travigen	3447-020-01	Потребляемый
Едкий натр	Sigma-Aldrich	S8045	Потребляемый
12-луночных тканевой культуры	BD Biosciences	353043	Потребляемый
Центрифугировать	Эппендорф	5417R	Оборудование
Орбитальный Шейкер	Нью-Брансуик Scienctific	C24	Оборудование
Увлажненном инкубаторе с воздушным 5% CO 2	Thermo Scientific	Модель 370	Оборудование
Накладные мешалки	IKA	Visc6000	Оборудование
Магнитная мешалка	Гранулирование	PC-210	Оборудование
Вакуум-эксикатор	-	-	Оборудование
Анализатор размеров частиц	Малверн	STP2000 Spraytec	Оборудование
Водяная баня	Fisher Scientific	Isotemp210	Оборудование
Спектрофотометр	Beckman	Beckman Coulter DU800UV/Visible спектрофотометр	Оборудование
Вихревой	Diagger	3030a	Оборудование
Считыватель микропланшетов	Molecular Devices	SpectraMax M2	Оборудование
Свет / флуоресцентный микроскоп	Олимп	IX71	Оборудование
Конфокальной микроскопии	Олимп	FV-500 лазерный сканирующий конфокальный микроскоп	Оборудование
Сканирующий электронный микроскоп	Carl Zeiss микрофонаroImaging	Лев 435 VP	Оборудование
Просвечивающего электронного микроскопа	JEOL	JEOL 1230	Оборудование