Method Article

Исследование кишечного воспаления в DSS-индуцированной модели IBD

DOI:

10.3791/3678

February 1st, 2012

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальные модели воспалительных заболеваний кишечника позволили нам изучить сложный врожденный и адаптивный иммунный ответ связана с патогенезом. Использование гистологического забил, количественное определение провоспалительных цитокинов и активность миелопероксидазы, можно приступить к оценке этих ответов видно при воспалительных заболеваниях кишечника.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) охватывает ряд кишечных патологий, наиболее распространенными из которых являются язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК). Как ЯК, так и БК, когда присутствуют в толстой кишке, создают схожий профиль симптомов, который может включать диарею, ректальное кровотечение, боль в животе и потерю веса. 1 Хотя патогенез ВЗК остается неизвестным, он описывается как многофакторное заболевание, которое включает в себя как генетические, так и экологические компоненты. 2

Существуют многочисленные и изменчивые животные модели воспаления толстой кишки, которые напоминают несколько особенностей ВЗК. Животные модели колита варьируются от тех, которые возникают спонтанно у восприимчивых штаммов определенных видов, до тех, которые требуют введения определенных концентраций химических веществ, вызывающих колит, таких как декстран сульфат натрия (DSS). Химические модели воспаления кишечника являются наиболее часто используемыми и лучше всего описываемыми моделями ВЗК. Введение DSS в питьевую воду вызывает острый или хронический колит в зависимости от протокола введения. 3 У животных, получавших DSS, наблюдается потеря массы тела и признаки жидкого стула или диареи, иногда с признаками ректального кровотечения. 4,5 Здесь мы описываем методы, с помощью которых можно охарактеризовать развитие колита и возникающую в результате воспалительную реакцию после введения DSS. Эти методы включают гистологический анализ окрашенных гематоксилином/эозином срезов толстой кишки, измерение провоспалительных цитокинов и определение активности миелопероксидазы (МПО), которая может быть использована в качестве суррогатного маркера воспаления. 6

Степень воспалительной реакции в состоянии заболевания может быть оценена по наличию клинических симптомов или по изменению гистологии в ткани слизистой оболочки. Гистологические повреждения толстой кишки оцениваются с помощью балльной системы, которая учитывает потерю архитектуры крипты, воспалительную инфильтрацию клеток, утолщение мышц, истощение бокаловидных клеток и абсцесс крипты. 7 Количественно уровни провоспалительных цитокинов с острыми воспалительными свойствами, таких как интерлейкин (ИЛ)-1β, ИЛ-6 и фактор некроза опухоли (ФНО)-α, могут быть определены с помощью традиционных методов ИФА. Кроме того, активность МПО может быть измерена с помощью колориметрического анализа и использована в качестве индекса воспаления. 8

При экспериментальном колите тяжесть заболевания часто коррелирует с увеличением активности МПО и более высокими уровнями провоспалительных цитокинов. Тяжесть колита и повреждения, связанные с воспалением, можно оценить путем исследования консистенции стула и кровотечения, а также оценки гистопатологического состояния кишечника с использованием срезов ткани толстой кишки, окрашенных гематоксилином/эозином. Фрагменты ткани толстой кишки могут быть использованы для определения активности МПО и продукции цитокинов. В совокупности эти меры могут быть использованы для оценки воспалительной реакции кишечника на животных моделях экспериментального колита.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Мышиной модели DSS-индуцированного острого колита

  1. Добавить декстран сульфат натрия (DSS) для автоклавного питьевой водой желаемой конечной концентрации (1-5%) (вес / объем) (т. е. Для того, чтобы 5% DSS решение, добавьте 25 мг DSS порошка на 500 мл воды из автоклавного) . Маточный раствор можно оставить при комнатной температуре в течение одной недели или при температуре 4 ° С до использования.
  2. В капоте биобезопасности, залить маточного раствора DSS в 50 мл Сокол труб (один необходимый в каждой клетке). Хранить исходный раствор для пополнения трубы в случае необходимости.
  3. Замените питьевую воду в каждой мыши клетку с DSS решение (в 5....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DSS колит широко используются химически индуцированных модель кишечного воспаления. В этой модели мышей приведены питьевой воды дополнена DSS, который, как полагают, быть токсичными для клеток эпителия кишечника и нарушают целостность слизистой оболочки барьер. 10 Администрации DSS вызывает острый колит, который характеризуется жидким стулом, фекальных кровотечение, и инфильтрация гранулоцитов. 10 Во время DSS администрации, колит, как правило, связаны со значительными потеря веса и наличие крови в.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа выполнена при поддержке грантов от канадского Института Здоровья Исследований (CIHR) и Крона и колит Фонд Канады (CCFC).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Название реагента / оборудование: Компания Номер по каталогу Комментарии
Эппендорф Безопасный-Lock Микроцентрифуга Тюбе (2 мл) Эппендорф 0030 120.094
Biotek EL808 Поглощение ридер Биотек EL808
Декстран сульфата натриевой соли реагента класса (молекулярный вес 36,000-50,000 Da) MP Biomedicals 160110
Gen5 (программное обеспечение) Биотек Версия 1.10.8
Hexadecyltrimethylammonium бромид (HTAB) Sigma-Aldrich H5882-100G
Перекись водорода, 30 мас.% Раствора в воде Sigma-Aldrich 216763 Хранить при температуре 2-8 ° C
Микротест плел 96-луночного плоским дном Sarstedt 82,1581 Для однократного использования
-дианизидина Sigma-Aldrich D-3252 Свет чувствительны. Хранить при температуре 2-8 ° C
Калий фосфат, двузамещенный Каледон 6620-1
Калия фосфат однозамещенный EMD Химические вещества PX1565-1
Ингибитор протеазы коктейль Sigma-Aldrich P8340 Хранить при температуре от -20 ° C
Тритон Х-100 Sigma-Aldrich T8787
Карбид вольфрама шарики для тканей Lyser II QUIAGEN 69997

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sands, B. E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation. Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).
  2. Danese, S., Fiocchi, C. Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

DSS ColitisInflammatory Bowel DiseaseHistological AnalysisCytokine QuantificationMPO ActivityStool ConsistencyHematoxylin EosinSpectrophotometerTissue HomogenizationDisease Activity Index

Related Articles