Основной Caenorhabditis Элеганс Методы синхронизации и наблюдения

Summary

Легкость поддержания и распространения нематоды С. Элеганс Сделать хорошую модель организма для работы. Возможность синхронизации червей позволяет работа со значительным количеством субъектов, в то же стадии развития, что способствует изучению одного конкретного процесса у многих животных.

Abstract

Исследования в области молекулярной и эволюционной биологии из Элеганс нематоды Caenorhabditis было начато в начале семидесятых годов Сидней Бреннер и с тех пор он широко используется в качестве модельного организма ^1. C. Элеганс имеет основные атрибуты, такие как простота, прозрачность и коротким жизненным циклом, которые сделали его подходящим экспериментальной системы для фундаментальных биологических исследований на протяжении многих лет ^2. Открытия в этой нематоды имеют далеко идущие последствия, так как многие клеточные и молекулярные процессы, контроль за развитием животного эволюционного консервативных ^3.

C. Элеганс жизненный цикл проходит через зачаточном состоянии и четыре личиночной стадии до животных в зрелом возрасте. Развитие может занять от 2 до 4 дней в зависимости от температуры. В каждом из этапов несколько характерных черт можно наблюдать. Знание его полного линии ячейки ^4,5 с глубоким annotatионных его генома превратить эту нематоду в большой модели в таких областях как нейробиология ^{6, 7,8} старения, стволовых клеток, биология ⁹ и зародышевой линии биологии ^10.

Дополнительной функцией, которая делает C. Элеганс привлекательная модель для работы с является возможность получения популяции червей синхронизированы на определенном этапе в относительно легкий протокол. Простота обслуживания и распространяется эта нематода добавлена ​​возможность синхронизации обеспечивает мощный инструмент для получения большого количества червей, которые могут быть использованы для широкого круга малых и высокой пропускной экспериментов, таких как экраны RNAi, микрочипы, массивные последовательности, иммуноблот или гибридизация, среди других.

Благодаря своей прозрачности, C. Элеганс структур можно выделить под микроскопом с помощью дифференциальных помех контрастной микроскопии, также известный как Nomarski микроскопиископировать. Использование флуоресцентных связующего ДНК DAPI (4 ',6-диамидино-2-фенилиндола), например, может привести к конкретной идентификации и локализации отдельных клеток, а также внутриклеточных структур / дефекты, связанные с ними.

Protocol

1. Протокол: Выращивание червей для отбеливания ¹¹

Большие популяции C. Элеганс может быть получен путем культивирования их либо в жидкой среде или в твердой среде в виде пластин. Они, как правило, выращенных на твердых NGM (Media нематода роста) и подается с Е. бактерии кишечной палочки, которая добавляется к пластинам либо жив, либо мертв (убит ^УФ-12, по ¹³ или тепло холодным ^14). Наиболее распространенные процедуры используются живые OP50 E. палочка, которая повреждена в синтезе урацила и не может перерасти в толстый слой, что бы скрыть червей.

1. С....

Discussion

Нематоды Синхронизация

Несколько отбеливания решения были описаны. Мы пытались пять различных рецептов (см. таблицу), а в наших руках, они не показывают существенные различия в синхронизации червь населения (рис. 1). Однако наши эксперименты показывают, что сделал такие параметры, как температура (рис. 2), отношение отбеливающий раствор: объем червей (рис. 3), а объем M9, с которой эмбрионы инкубировали штриховки (рис. .......