Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

13.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/4071

⸱

19 сентября 2012 г.

 ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery and Cellular & Molecular Physiology, Yale University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Метод для загрузки субвентрикулярной зону (СВЗ) клеток кальцием индикатор красители для записи активности кальция описано. Послеродовой SVZ содержит плотно упакованных клеток, включая нервные клетки предшественники и нейробластов. Вместо того чтобы использовать ванну загрузки мы вводили красителя давление внутри тканей позволяет лучше красителя диффузии.

Аннотация

Субвентрикулярной зону (СВЗ) является одним из двух нейрогенных зон в постнатальном мозге. SVZ содержит плотно упакованных клеток, включая нервные клетки предшественники с астроцитов особенностей (так называемые SVZ астроциты), нейробластов и промежуточных клеток-предшественников. Нейробластов родился в SVZ касательной мигрировать на большие расстояния в обонятельную луковицу, где они дифференцируются в интернейронов. Межклеточной передачи сигналов через молекул адгезии и диффузии сигналы играют важную роль в борьбе с нейрогенеза. Многие из этих сигналов вызывают межклеточное деятельности кальция, который передает информацию внутри и между клетками. Кальций деятельности, таким образом, отражает активность внеклеточных сигналов и является оптимальным способом понять функциональное межклеточной сигнализации между клетками SVZ.

Кальций деятельность изучалась во многих других регионах и типах клеток, в том числе зрелые астроциты и нейроны. Тем не менее, традиционный метод, чтобы лоаг клеток кальцием индикатор красителя (например, ванны нагрузки) не был эффективным при загрузке всех типов SVZ клетки. Действительно, сотовая плотность в SVZ препятствует диффузии красителя в ткань. Кроме того, готовится сагиттальных будет лучше сохранить трехмерное расположение клеток СВЗ, в частности, поток миграции нейробластов на ростральной-каудальной оси.

Здесь мы опишем методы для подготовки сагиттальной разделов, содержащих SVZ, загрузка клетки SVZ с кальцием краситель индикатор, и приобретение кальция деятельность с покадровой фильмов. Мы использовали Fluo-4 утра краситель для загрузки SVZ астроциты с помощью давления приложения внутри ткани. Кальций деятельности был записан при помощи сканирующей конфокальной микроскопии позволяет точное разрешение для различения отдельных клеток. Наш подход применим и к другим нейрогенных зон, включая взрослого гиппокампа субгранулярной зоны и эмбриональных нейрогенных зон. Кроме того, другие виды красителей можетнаноситься с помощью описанного метода.

Протокол

1. Подготовка Solutions, Dissection, и Vibratome

  1. Решения должны быть готовы в нужный осмолярности и рН (табл. 1). По сравнению с искусственной цереброспинальной жидкости (ACSF), рассечение раствор готовят с более низкой концентрации натрия и кальция, а более высокие концентрации магния. Это необходимо для минимизации токсичности эффектов во время нарезки.
  2. Оба рассечения и ACSF решения должны быть насыщенным с 95% O 2/5% CO 2 при пропускании по крайней мере 10 минут, чтобы достичь желаемого рН 7,3.
  3. Подготовка ледяной бане в лоток. Место рассечения пластины в ледяной бане и заполнить с рассечением решение. Bubble вскрытии пластины.
  4. Подготовка vibratome путем создания ледяной бане. Поместите секционирования блюдо в ледяной бане, заполните блюдо с рассечением решение, и пузырь.
  5. Заполните кусочек проведения камера с ACSF и пузырь, чтобы решение адекватно газированные независимо, где ломтики находятся.

2. Удаление ткани головного мозга

Острые кусочки мозга, как правило, здоровее с молодыми мышами. Сотовая архитектура послеродовой SVZ в зрелом грызунов вокруг день после рождения (P) 20 1. Таким образом, мы стараемся ограничить наши эксперименты на мышь возрасте от P20-P30, но мы провели успешные эксперименты на мышах же стара, как 3 месяца. На протяжении обработки тканей, надо иметь в виду свести к минимуму механические движения и давления на мозг, поддерживают охлаждением условиях, и подвергать SVZ к решению как можно быстрее следующей жертвой.

  1. После введения пентобарбитала, мыши быстро обезглавлен. Мех снимается и разрезы делаются через основание черепа. Глава затем помещается в лоток с рассечения решение.
  2. В то время как стабилизация голову щипцами, непрерывное сокращение производится вокруг черепа, а иногда и до средней линии с microscissors. Будьте осторожны, чтобы свести к минимуму контакт с тканью. Так как обонятельные луковицы является конечным пунктом новорожденных нейронов из SVZ, надо помнить о сохранении этого региона, особенно во время удаления кости вокруг этой области. Microscissor сокращений составил около череп должен быть на спинной стороне, для легкого удаления части черепа.
  3. Удаление черепа покрывающей мозг теперь отделено от костей под мозга. Если сокращения в предыдущем шаге сделаны правильно, это вышележащих кости могут быть легко удалены с помощью пинцета или щипцов.
  4. В то время как все еще держа голову щипцами, можно использовать хирургические лезвия для корректного удаления нескольких кусков ткани головного мозга до нарезки, например, следующие. Корональных разрез может быть сделан на уровне лямбда. Сагиттальный сокращения могут быть сделаны с обеих сторон мозга сбоку от SVZ. По самым скромным подсчетам составит ~ 2,5 мм от средней линии. При желании, мозг также может быть hemisected здесь. Эти сокращения и FACILitate монтажа ткани и позволяют SVZ должно быть достигнуто быстрее, когда мозг нарезки. Важно помнить, чтобы оказывать минимальное количество механических сил на мозге (например, не толкать или тянуть).

3. Острый Подготовка фрагмента мозга

  1. Для подготовки последующих шагов, убедитесь, что супер клей используется для монтажа ткани бесплатно сабо и готовы обратиться к vibratome пластины. Важно, чтобы идти как можно быстрее, не повреждая мозга.
  2. Мозговая ткань может быть зачерпнул снизу, которая отделяет ткани от основной кости одновременно отделения нервы.
  3. Ткань монтируется и наклеенные на пластину и помещают на vibratome. В связи с ростральной-каудальном анатомии SVZ, мы сосредоточились на том, сагиттальных, как она сохраняет миграционный путь нейробластов, глиальные оболочки, и сосудистую, которые в основном ориентированы в этом направлении. Можно либо движениеЕНТ ткани по срединной линии или на плоской поверхности, созданные путем сокращения сагиттальной сбоку от SVZ. Необязательный шаг заключается в размещении в 3% агарозном блока за тканью в качестве упора на лезвие, как кусочки оторваться. Мы использовали преимущественно цианакрилатного на основе супер клей.
  4. Промойте лезвие с этанолом для удаления масел и промыть дистиллированной водой. Поместите лезвие ножа. Установите держатель лезвия к vibratome.
  5. Настройте параметры vibratome, чтобы сократить ткани при толщине 250-350 мкм на срез. Важно, чтобы сократить использование высокочастотных вибраций и низкая скорость.
  6. Раздел постепенно через ткань. Появление обонятельной луковице является хорошим показателем, что одна рядом с SVZ в сагиттальных как наиболее боковой ломтиками будет содержать ни регионе. Другие ориентиры для поиска включают желудочка и утолщение мозолистого тела, под которым SVZ находится. SVZ появится первый в более боковых СагитТаль ломтиками. RMS покажет в медиальной сагиттальной ломтиками.
  7. Удалите ломтики содержащие SVZ с пластиковой пипетки Пастера с наконечником отрезать. Передача в камеру холдинга срез. Мы часто получения более ломтиками, чем мы можем использовать в течение рабочего дня. Тем не менее, ломтики будет варьироваться от количества клеток, содержащих SVZ. Иногда бывает необходимо просмотреть несколько ломтиков, чтобы найти тот желанный для работы с изображениями.

4. Подготовка микроскопа и красителей

Ломтиками требуют одного часа времени инкубации в ACSF, чтобы оправиться от вскрытия и нарезки. Несколько шагов может быть выполнено в течение этого периода восстановления срез.

  1. Подготовка пипетки для красителя кальция и / или применение препарата
    1. Стеклянные пипетки нужно, чтобы у кончика 2-3 мкм в диаметре и длиной наконечника (~ 2 мм) и угол (~ 16 ° С в течение держатель пипетки), который предотвращает контакт с перфузионной камере и оставляет место для размещенияцель.
    2. Можно подготовить обычно 6-8 пипетки давления на каждый день эксперимента.
  2. Подготовка кальция красителя
    1. При подготовке рабочего раствора (4-5 мкм ванны, 250 мкм под давлением приложение), то лучше, чтобы выставить минимальный размер ДМСО к клеткам. Это может быть достигнуто путем высокой концентрации запасов. Например, для Fluo-4, одну пробирку, содержащую 50 мкг используется в сутки. Можно сделать 10 фондовом мМ этого аликвоты путем добавления 4,6 мкл Pluronic F-127 20% раствора в ДМСО.
  3. Подготовка микроскопа установки (рис. 2).
    1. Использование перистальтический насос для подачи раствора помогла свести к минимуму изображения дрейф. Запустите перистальтического насоса до ACSF позволяют запустить через перфузии линии и убедиться, что он без пузырьков.
    2. Установить входе в трубу на перфузии камеры и убедиться в отсутствии утечек.
    3. Установите вакуумный наконечник ENSЮр, что решение в настоящее время отсасывают из перфузии камеры. Убедитесь, что она находится на адекватном уровне, так что задача погружается в надлежащее рабочее расстояние, но не настолько высокие, что решение может перекинуться на камеру. Низкий уровень решения также минимизирует искажения потока. Постоянное стремление также может быть проверено путем прослушивания устойчивость.

5. Краска Загрузка

Этот метод был подробно описан в другой рукописи 2. Пожалуйста, ознакомьтесь с цифрами в нем.

  1. Красителя Ванна загрузки
    1. Сделайте 1-2 мл рабочего раствора красителя. Для Fluo-4 AM, концентрация 4-5 мкм достаточно для маркировки SVZ нейробластов.
    2. Ломтики сначала перевели в 35 мм культуры блюдо с сеткой нижней, которая уже заполнена ACSF. Заменить решение с помощью 3 мл пипетки пластиковые передачи аккуратно удалить ACSF, одновременно добавив вalcium рабочий раствор красителя.
    3. Инкубировать при 37 ° С в течение 30-60 мин в 5% CO 2 газ-контролируемой среде.
    4. Поместите кусочек обратно в ACSF заполненные проведение камеру, чтобы смыть краску, которая не вступила клеток. Кроме того, можно поместить его прямо на камере микроскопа перфузии, на котором работает ACSF. Это мыть период 30-45 мин.
    5. Передача срез к перфузионной камере.
  2. Давление применением красителя
    1. Передача ломтик от проведения камере перфузии камеры на микроскоп установки.
    2. Заполните стеклянную пипетку с рабочего раствора, что составляет 250 мкм и место на микроманипулятора.
    3. Опустите пипетку в область интересов. Пипетки может быть размещена таким образом, чтобы кончик либо нескольких микрометров выше срез поверхности или похоронены несколько микрометров ниже среза поверхности, но от записанного региона. Угол пипетки не AFFEКТ загрузки эффективность. Когда изображение ниже среза поверхности, мы находим, что размещение пипетки ниже изображения самолет будет маркировать нашу желаемую область изображения лучше.
    4. Когда давление применением красителя, установить Picospritzer так, чтобы она <3 атм. Мы еще не оценили объем красителя диффузии, так как это является предметом изменчивости диаметра кончика пипетки, давление и плотность ткани, где краситель. Мы применяем просто пока не добьемся желаемых нагрузку, как оценивать на глаз. Минимизации ущерба для среза во время нанесения, особенно когда головка помещена под срез поверхности. Подать заявку на 1-2 мин. Иногда повторного применения необходимы в зависимости от маркировки, как оценивать на глаз. Для этого продолжительность концентрации и приложений, мы обнаружили, что поверхность применением красителя преимущественно называет нейробластов в то время как под поверхностью применение преимущественно называет астроцитов. Тем не менее,> 3 мин приложений при 500 мкМ также маркировать нейробластовнезависимо от того, кончик выше или ниже поверхности среза (JC Платель, неопубликованные наблюдения). Разрешить для стирки и кусочек восстановления в течение 30-45 мин.

6. Конфокальной микроскопии кальция активность

  1. Найти интересующую область сначала с низким энергопотреблением, таких как объективный 4x или 10x. Поместите в центре поля, перед переходом на более высокую мощность цель. На данный момент, можно оценить общее состояние здоровья срез, отметив появление клеток SVZ под дифференциального интерференционного контраста (DIC). Здоровые клетки появляются круглые и пухлые. Кроме того, здоровые клетки покажет слабый Fluo-4 нагрузку, как предполагалось нет нагрузки на всех или ярко флуоресценции (умирающих клеток).
  2. Опустите воды погружения цель на область интересов, которая в настоящее время красителя загружены. Либо 40x или 60x целью было достаточно для наших потребностей, хотя 40x обеспечивает более широкое поле зрения и обеспечивает большую пипетку доступа. Когда изображение нижеповерхности, мы часто ходим по меньшей мере 15 мкм ниже среза поверхности, где 3-мерного архитектуры и клеточной здоровья лучше сохраняются.
  3. Убедитесь, что перфузия и вакуума работает надлежащим образом.
  4. Настройте микроскоп, так что покадровой разрешение и пространственное разрешение устанавливается в нужное ставки. Для конфокальной микроскопии, эти факторы должны быть сбалансированы как увеличение временное разрешение обычно приводит к потере пространственного разрешения за счет сканирования характер системы. Для кальция деятельности, мы отображаемого кадра примерно каждый второй с 512x512 пикселей. Если несколько каналов, приобретенные отдельно необходимо, это также влияет на приобретение ставки. Установить продолжительность фильма (2-10 мин).
  5. Начать работать. При выполнении фармакологических исследований, мыть на антагонисты или не десенсибилизирующее агонисты, по крайней мере 5-10 минут, а затем сделать еще один фильм из 5-10 мин. Агонисты, которые могут уменьшить чувствительность рецепторов может быть острой применяется, например, с помощью пр.Essure пипетки контролируется микроманипулятора.

7. Кальций анализ

Анализ следующие стандартные процедуры, которые мы описали в предыдущее публикациях 2-4. F 0 (т. е. базовая линия) и F являются средние интенсивности флуоресценции измеряли во всех регионах, представляющих интерес (трансформирования) и в каждом ROI, соответственно. Изменение флуоресценции считается Ca 2 + увеличение, если оно было> 15% F / F 0 увеличением. Внутриклеточного Ca 2 + изменения были рассчитаны с использованием Calsignal 5.

8. Представитель Результаты

Мы смогли получить выборочной загрузки клеток SVZ в зависимости от красителя протоколы загрузки описано выше, и в других местах 2-4,6. Загрузка Ванна или приложения давления на срезе поверхности Fluo-4 AM (4-5 или 250 мкм, соответственно) метки основном нейробластов. В то время как давление приложение может загрузить neurobдлится более быстро, чем ванна нагрузка в одном срез, ванна загрузки позволяет одновременной загрузки нескольких ломтиков. Мы подтверждения личности меченых клеток, как нейробластов из (1) ли они отображают миграционного поведения 4,7, (2) их морфологии, (3) отрицательная окраска сульфородамина 101, астроцитов конкретного красителя 3 или (4) положительное окрашивание DCX-DsRed выражении (JC Платель, неопубликованные наблюдения). Нейробластов мигрировать быстрее (в среднем 60 мкм / ч) при физиологической температуре 4,7-9, но их движение может быть легко наблюдать даже при комнатной температуре. Движение нейробластов не представляет проблемы в отношении размещения регионах интересов, (ROI) для отслеживания кальция деятельность с нашими фильмами, как правило, короткие по продолжительности. Тем не менее, в течение долгого периода ожидания, например, при обмене лекарственный раствор, следователи должны быть осторожны, чтобы соответствовать трансформирования в контроле и лечении периоды. Это не редкость для нейробластов мигрировать внутрь или наружу я поля maging или фокальной плоскости.

Давление применение Fluo-4 AM (250 мкм) глубоко в часть и в течение ограниченного срока (<2 мин) преимущественно называет SVZ астроциты 2. Astrocyte маркировки была подтверждена положительными маркировки с сульфородамина 101 и их морфология, особенно в присутствии прогнозы и endfeet на кровеносные сосуды, которые мы недавно описал 3. Используя эти методы, мы наблюдали спонтанную активность в обоих нейробластов SVZ и астроцитов населения (рис. 1). Деятельность в астроциты часто принимает форму волны, которые занимаются 3 кровеносных сосудов. Кроме того, использование кальция визуализации, как анализ, применение фармакологических агонистов выявила или подтвердила выражение GABA рецепторы на нейробластов и астроциты 6, AMPA и NMDA-рецепторов на нейробластов 4.

Данные

1 "SRC =" / files/ftp_upload/4071/4071fig1.jpg "/>
Рисунок 1. Распространение кальция деятельность в астроциты. (A) представитель среднем изображение с покадровой записью кальция деятельности. Астроциты в SVZ были загружены с давлением применение Fluo-4 утра в глубину среза. Фильмы были приобретены на 0,75 с временем действия. Регионы интереса (ROI) расположены над клетки, обладающие активностью. (B) Следы от РИ находится над клетками из фильма изображены на (A). Следы были отфильтрованы с помощью скользящей средней и нормирован. Вертикальная шкала представляет собой 2 х f / F 0, где F является интенсивность сигнала и F 0 является средним сигнала базовой и f = FF 0.

figure-protocol-1
Рисунок 2. Изображение перфузии системы. Один конец трубки погружают в 95% O 2/5% CO 2 газ-рerfused решение. Затем раствор перфузии через трубку и в баню камеры перистальтического насоса (не показан). Другой конец вставляется в решении входе в ванну камеры установлены на платформе. Стремление наконечника подключаются к решению выходе из камеры и установлены на уровне, чтобы определить решение высоту. Из розетки, стремление чаевые подключен к вакуумной линии, которая всасывает раствор из камеры в контейнер для отходов. Перфузионной системы показана у столик микроскопа для наглядности.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Кальций визуализации клеток SVZ была использована для изучения закономерностей в спонтанной активности в нейробластах 10, рецептор канала выражения в обоих нейробластов и астроциты 4,6,8 и астроцитов волны кальция 3. Так как клетки в SVZ либо незрелый или иметь глиальных свойства, они не срабатывают потенциалы действия 11,12, что означает, что миллисекунд изменения в напряжении потенциальных ориентировочной активности в зрелом сети не применимо в данном регионе. Таким образом,...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами NIH (DC007681, AB), CT стволовых клеток гранта (AB), Парди основания (AB), Predoctoral Рут Л. Kirschstein Национальный исследовательский службы Awards (НРСА) (SZY) и NSF аспирантуре Стипендия (BL). Мы благодарим членов Bordey лаборатории за полезные замечания по рукописи. Настоящий материал основан на работе частично поддержана штата Коннектикут под сотовый Коннектикут стволовых Программа исследовательских грантов. Его содержание несут исключительно авторы и не обязательно отражают официальную точку зрения штата Коннектикут, Департамент здравоохранения штата Коннектикут или КТ инноваций, Incorporated.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Растворенное вещество Компания Номер в каталоге Dissection (мМ)
Сахароза Сигма S0389 Dissection: 147 мм
ACSF: 0 мм
NaCl Сигма S9888 Dissection: 42 мм
ACSF: 126 мм
KCl Сигма P3911 Dissection: 2,5 мм
ACSF: 2,5 мм
MgCl 2 .6 H 2 O Сигма M9272 Dissection: 4,33 мМ
ACSF: 1 мМ
NaH 2 PO 4. H 2 O Сигма S8282 Dissection: 1,25 мм
ACSF: 1,25 мм
Глюкоза Сигма G8270 Диссеие: 10 мМ
ACSF: 10 мМ
NaHCO 3 Сигма S6014 Dissection: 26 мм
ACSF: 26 мм
CaCl 2 · 2H 2 O Сигма C3306 Dissection: 1,33 мм
ACSF: 2 мм

Таблица 1. Список химических и рецепты решения вскрытие и ACSF.

[Заголовок]
Имя Компания Номер по каталогу Комментарии
Vibratome Leica VT 1000S
Super Glue Surehold или 3M Surehold 3G супер клей или 3M Vet-Бонд
Dissection инструменты Roboz или Ted Pella
Fluo-4 утра кальций-чувствительных красителей Invitrogen F14201
Орегон Зеленый ВАРТА-1 утра кальций-чувствительных красителей Invitrogen O6807
Pluronic F-127 20% раствора в ДМСО Invitrogen P3000MP
Вертикальный конфокальной микроскопии Олимп FV300 или FV1000
Вода погружения цели Олимп LUMPlanFl 40 х W / IR (NA 0,80); LUMPlanFl 60 х W / I (NA 0,90)
Микроманипуляторы Sutter MPC-200/MPC-325/MPC-385
<Регулятор давления/ TD> Parker Hannifin Picospritzer <3 PSI во время нанесения
Внесите съемника Саттер или Narshige Саттер Р-97 или Narshige PP-830
Стеклянные пипетки Sutter BF150-110-10 ID: 1,10, диаметр: 1,50
Перистальтический Harvard Apparatus Модель 720 Скорость потока: 1 мл / мин
Палата ванной Warner Instruments RC-26 GLP Низкий профиль позволяет объективно оформление
Трубы Tygon
Регулятор температуры Warner Instruments TC-324B/344B

Таблица 2. Материалов / оборудования списка.

Ссылки

  1. Peretto, P., Giachino, C., Aimar, P., Fasolo, A., Bonfanti, L. Chain formation and glial tube assembly in the shift from neonatal to adult subventricular zone of the rodent forebrain. J. Comp Neurol. 487, 407-427 (2005).
  2. Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice. Front. Neurosci. 4, 10-3389 (2010).
  3. Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Gap junction-mediated calcium waves define communication networks among murine postnatal neural progenitor cells. Eur. J. Neurosci. , (2011).
  4. Platel, J. C., Dave, K. A., Gordon, V., Lacar, B., Rubio, M. E., Bordey, A. NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network. Neuron. 65, 859-872 (2010).
  5. Platel, J. C., Dupuis, A., Boisseau, S., Villaz, M., Albrieux, M., Brocard, J. Synchrony of spontaneous calcium activity in mouse neocortex before synaptogenesis. Eur. J. Neurosci. 25, 920-928 (2007).
  6. Young, S. Z., Platel, J. C., Nielsen, J. V., Jensen, N. A., Bordey, A. GABAA increases calcium in subventricular zone astrocyte-like cells through L- and T-type voltage-gated calcium channels. Front. Cell. Neurosci. 4, 8(2010).
  7. Bolteus, A. J., Bordey, A. GABA Release and Uptake Regulate Neuronal Precursor Migration in the Postnatal Subventricular Zone. J. Neurosci. 24, 7623-7631 (2004).
  8. Platel, J., Heintz, T., Young, S., Gordon, V., Bordey, A. Tonic activation of GLUK5 kainate receptors decreases neuroblast migration in a whole mount preparation of the subventricular zone. J. Physiol. (Lond). 586, 3783-3793 (2008).
  9. Nam, S. C., Kim, Y., Dryanovski, D., Walker, A., Goings, G., Woolfrey, K., Kang, S. S., Chu, C., Chenn, A., Erdelyi, F., Szabo, G., Hockberger, P., Szele, F. G. Dynamic features of postnatal subventricular zone cell motility: a two-photon time-lapse study. J. Comp. Neurol. 505, 190-208 (2007).
  10. Lacar, B. L., Platel, J. C., Bordey, A. GABA controls Ca2+ activity-dependent network synchrony in the adult neurogenic forebrain. Neuroscience Meeting Planner, San Diego, CA, , Society for Neuroscience. (2007).
  11. Liu, X., Bolteus, A. J., Balkin, D. M., Henschel, O., Bordey, A. GFAP-expressing cells in the postnatal subventricular zone display a unique glial phenotype intermediate between radial glia and astrocytes. Glia. 54, 394-410 (2006).
  12. Wang, D. D., Krueger, D. D., Bordey, A. Biophysical properties and ionic signature of neuronal progenitors of the postnatal subventricular zone in situ. J. Neurophysiol. 90, 2291-2302 (2003).
  13. Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., Huber, D., Chiappe, M. E., Chalasani, S. H., Petreanu, L., Akerboom, J., McKinney, S. A., Schreiter, E. R., Bargmann, C. I., Jayaraman, V., Svoboda, K., Looger, L. L. Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators. Nat. Methods. 6, 875-881 (2009).
  14. Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., Teramoto, T., Chang, Y. F. An expanded palette of genetically encoded Ca(2) indicators. Science. 333, 1888-1891 (2011).
  15. Shigetomi, E., Kracun, S., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. A genetically targeted optical sensor to monitor calcium signals in astrocyte processes. Nat. Neurosci. 13, 759-766 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Острые срезы мозгазагрузка флуоресцентного красителяконфокальная микроскопиятаймлапс-визуализациямиграция нейробластовмаркировка астроцитовподача давленияподготовка срезов
Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.