Методическая статья

Создание определяемых газообразных сред для изучения влияния гипоксии на С. Элеганс

DOI:

10.3791/4088

⸱

20 июля 2012 г.

 ,  , 
1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Molecular and Cellular Biology Program, University of Washington

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В настоящем документе подробно описано, как использовать непрерывный поток гипоксии камеры для создания атмосферы с определенной концентрации O 2, Чтобы понять биологические реакции со снижением O 2. Эта система проста в установке и обслуживании, и достаточно гибкой, чтобы удовлетворить широкий спектр O 2 Концентрациях и модельных системах

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кислород необходим для выживания всех многоклеточных животных, за одним известным исключением1. Снижение доступности O2 (гипоксия) может возникать при патологических состояниях, в процессе нормального развития или при изменении условий окружающей среды2-5. Понимание клеточных сигнальных путей, участвующих в ответе на гипоксию, может дать новое представление о стратегиях лечения различных патологий человека, от инсульта до рака. Достижение этой цели было затруднено, по крайней мере частично, техническими сложностями, связанными с контролируемым воздействием гипоксии на генетически модифицируемые модельные организмы.

Нематода Caenorhabditis elegans идеально подходит в качестве модельного организма для изучения гипоксического ответа, так как она легко культивируется и поддается генетическим манипуляциям. Более того, можно изучать клеточные ответы на конкретные концентрации O2 при гипоксии без побочных эффектов, поскольку C. elegans получает O2 (и другие газы) путем диффузии, в отличие от организмов с развитой дыхательной системой6. Факторы, участвующие в ответе на гипоксию, консервативны у C. elegans. Фактический ответ на гипоксию зависит от доступной конкретной концентрации O2. У C. elegans воздействие умеренной гипоксии вызывает транскрипционный ответ, опосредованный главным образом hif-1, высококонсервативным гипоксия-индуцируемым фактором транскрипции6-9. Эмбрионам C. elegans необходим hif-1 для выживания при 5,000-20,000 ppm O27,10. Гипоксия — это общий термин, означающий «содержание O2 ниже нормы». Нормоксию (нормальное содержание O2) также бывает трудно определить. Обычно мы считаем нормоксией комнатный воздух, в котором содержится 210,000 ppm O2. Однако было показано, что C. elegans имеет поведенческое предпочтение к концентрациям O2 от 5-12% (50,000-120,000 ppm O2)11. У личинок и взрослых особей hif-1 предотвращает индуцированную гипоксией диапаузу при 5,000 ppm O212. Однако hif-1 не играет роли в ответе на более низкие концентрации O2 (аноксия, операционное определение <10 ppm O2)13. При аноксии C. elegans переходит в обратимое состояние анабиоза, при котором прекращается всякая микроскопически наблюдаемая активность10. Тот факт, что при различных условиях возникают разные физиологические ответы, подчеркивает важность экспериментального контроля за гипоксической концентрацией O2.

Здесь мы представляем метод конструирования и применения экологических камер, создающих надежные и воспроизводимые условия гипоксии с заданными концентрациями O2. Метод непрерывного потока обеспечивает быструю эквилибрацию камеры и повышает стабильность системы. Кроме того, прозрачность и доступность камер позволяют напрямую визуализировать животных, подвергающихся воздействию гипоксии. Далее мы демонстрируем эффективный метод быстрого сбора образцов C. elegans после воздействия гипоксии, что необходимо для наблюдения за многими быстрообратимыми изменениями, возникающими при гипоксии10,14. Данный метод создает базовую основу, которую можно легко модифицировать под индивидуальные потребности лаборатории, включая использование различных модельных систем и разнообразных газов.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Строительство экологической палаты

  1. Выберите наименьший разумный объем камеры, необходимые для сферы вашего проекта. Палата должна быть изготовлена ​​из газов (O 2) непроницаемый материал. Pyrex кристаллизации блюда, Anaeropack коробки или большие литые акриловые коробки (Ellard Instrumentation), могут быть использованы. Мы обнаружили, что 9 50 мм пластин может поместиться в 100 х 50 KIMEX блюдо кристаллизации. Стеклянные пластины можно использовать в качестве крышки для посуды Pyrex кристаллизации.
  2. Просверлите отверстие в выбранной камере и установить с пластиковой мужчина Luer для штуцером для шланга установки (Cole Parmer). Фурнитура может быть обеспечено путем трубопроводной арматуры или эпоксидной смолой. Установить аналогичную установку на противоположной стороне контейнера, чтобы обеспечить поток газа в и из камеры. Если это возможно, смещение отверстия увеличить турбулентного перемешивания.
  3. Получить сжатых газовых цистерн с определенной концентрации O 2 (сбалансирована с N 2), которые сертифицированы стандартом для O 2 сотрудничествеntent или, при отсутствии кислорода, чистого N 2 (<10 мг O 2). Использование автоматического переключения на регуляторы для долгосрочных исследований, чтобы избежать нарушения кислорода в палаты.
  4. Организменном ответ на гипоксию было показано, что зависит от температуры 15. Установив камеру в инкубаторе, различных температурах может быть сохранен. Температура в инкубаторе может быть неравномерным и, таким образом, целесообразно использовать регистратор данных температуры постоянно измерять температуру внутри камеры.

2. Подключение газа к экологической палаты

  1. Для всех соединений, использовать одну восьмую-дюймовый внешний диаметр труб связана либо оснастки разъемы или компрессионные фитинги. Трубы должны быть непроницаемыми и инертен по отношению к O 2, таких, как фторированные пропилена этилена (FEP) или нейлона (Cole Parmer). Для схема завершения установки, см. рис 1.
  2. Подключите комнажата газовых баллонов на устройство управления потоком, такие как контроллер массового расхода (Сьерра-инструменты) или ротаметр (Aalborg). Убедитесь, что давление на входе в резервуар находится в пределах потока устройства и штуцером для шланга арматуры. Двухступенчатые регуляторы, как правило, используется, со вторым этапом значение требуемого давления [См. раздел три для выбора соответствующего расхода]
  3. Гидратов газа через кипящей дистиллированной воды с помощью газового баллона промыть фриттованного цилиндра, то прямой в одну из арматуры на окружающую камеру, оставляя вторую установки открыты для выхлопных газов (см. Рисунок 1). Для краткосрочных исследованиях, гидратации газов защищает от пластины dessication, но контроля влажности могут быть необходимы для долгосрочных исследований.
  4. Dow Corning Вакуумная смазка может использоваться для герметизации камеры. Место веса на крышке камеры для обеспечения герметичного уплотнения. Чтобы убедиться в герметичности и адекватного потока, провести небольшой бассейн с водой в ладони унаши руки в перчатках, чтобы из установки на камеры и проверьте пузыри.

3. Выбор скорости потока

  1. Предполагая, совершенный смешивания, есть 90% газообмена газовой атмосферы каждый раз объем камеры заменяют (закон Фика). Например, в 100 мл камеру с расходом 100 мл / мин, воздушный оригинальный дом в камере будет заменено 90% от желаемого газа через 1 минуту, и будет асимптотически приближаться полный обмен на 90% каждую минуту в последующий период.
  2. Высшее расхода и меньше контейнеров достигнет желаемой концентрации кислорода быстрее. Для 100 х 50 KIMEX контейнеров (400 см), скорость потока 120 мл / мин достигнет 99,9% в обмен за 10 минут (3 обменов). Этот расход подходит для большинства условий кислорода. Насколько нам известно, не было систематического исследования того, как скорость изменения концентрации O 2 влияет на ответ на C. Элеганс.

  1. Черви подвержены условиях гипоксии обычно вырваться на поверхность агара. Чтобы избежать этого, поместите кольцо пальмитиновой кислоты (10 мг / мл в этаноле) по краям пластин. Пальмитиновая кислота выйдет из решения, как этанол испаряется, образуя физический барьер. Пальмитиновая кислота барьеры не влияют на скорость откладки яиц, плодовитости и продолжительности жизни C. Элеганс 16,17. Зарывшись в землю, не чаще возникают в условиях гипоксии, так что дополнительные профилактические меры, как правило, не требуется.
    1. Создание синхронизированных популяций отбеливания беременных взрослых в небольшую каплю щелочного раствора отбеливателя на unseeded нематода рост средств массовой информации (НГО) пластины 18. В отличие от стандартных большие партии гипохлорита отбеливания протоколы, выбрать 1-100 животных в капле раствор отбеливателя на поверхности пластины НГО, а затем позволить раствор отбеливателя для поглощения в пластине
    2. Не подвергайте беленой эмбрионов к гипоксии, так как это может уменьшить жизнеспособность 13. Для сбора молодых эмбрионов (2-4 ячеек), беременных взрослых может быть нарезанной в небольшом объеме воды с лезвием и эмбрионов переехал в пластины в рот пипеткой для последующего воздействия гипоксии.
  3. Уплотнение пластин в экологической палаты. Контрольные животные должны содержаться в нормоксии (дом воздуха) при той же температуре, как лечение глистов. Существует не наблюдается различий между образцами оставил в доме воздух и те, которые поддерживаются в одинаковом камера с домом воздуха, проходящего через них. Начать газа и поддерживать экспозиции нужное время. Для обеспечения единообразия в рампу, убедитесь, чтозаменить воду в бутылку газ мыть перед экспозицией.
  4. Для анализа выживаемости эмбрионов, позволят червям развиваться в течение 48 часов после возвращения в помещение воздух, после чего они должны быть личинок четвертого возраста / дня взрослых. Оценка за выживание, любая цензура червей, которые не могут быть учтены.
  5. Для визуализации животных, подвергшихся воздействию гипоксии, двигаться червей каплю M9 на 22 мм 2 покровного и обратить на площадке в 2% агарозном в M9 18. При необходимости, левамизол (25 мм) или азид натрия (10 мМ) можно использовать в качестве анестезии. Азид натрия и левамизол могут запутать некоторых замечаний в связи с токсичностью и должны быть разумно использованы 19.

5. Быстрое Урожай гипоксия, подвергшихся воздействию черви (Пример: Подготовка проб для HIF-1 Западно-анализ)

Многие гипоксии-индуцированные эффекты быстро обратный по возвращении в помещение воздуха, включая возобновление производства яиц 12, фосфорилирование митотического эпитоповв эмбриогенезе 13 и деградации HIF-1 белок 9,20. Быстрая изоляция животных, подвергшихся воздействию гипоксии, необходимые для получения воспроизводимых эффектов в этих условиях. С помощью этой установки, животные могут быть собраны и замораживали в жидком азоте в течение менее двух минут. В то время как перчатка камерах коробка гипоксии позволяют манипуляции образцов в бескислородных условиях, их стоимость и практичность в условиях, отличных от гипоксии ограничивает их полезность.

  1. Рост Бристоль N2 червей 4 10 см роста (HG) пластин до большинства червей беременных взрослых 18. Вымойте червей на 15 мл коническую трубку с 1:05 щелочным раствором отбеливателя и инкубировать при вращении до черви начинают растворяться, не более 5 минут 9. Вымойте червей в три раза с М9, летел вниз со скоростью 1500 мкг между каждой стирки, не торможение.
  2. Пластина беленой эмбриона на 8 150 мм пластин НГО и позволяют развиваться личинки L4 (~ 48 часов Бристоль N2 при 22 ° C).Перемещение плит климатические камеры и подвергать воздействию гипоксии (1000 млн., 5000 т) и бескислородных (N2) условиях в течение 4 часов. Экспозиция раз будет меняться в зависимости от эксперимента. В то время как воздействие гипоксии, оказывает непосредственное влияние на скорость откладки яиц, два эмбриона клетки умирают после 16-18 часов после заражения 12. При этом гипоксия установки камеры, нижний предел воздействия ограничивается скоростью обмена атмосферу, необходимые для достижения равновесия.
  3. Этикетка один 1,5 мл микроцентрифужную пробирку и один 15 мл коническую трубку для каждого экспериментального образца. Черви воздействию гипоксии, скорее всего, придерживаться стороны трубки во время сбора урожая. Чтобы избежать этого, место 100 мкл 1% сульфата натрия додецилсульфат (SDS) в каждой 15 мл коническую трубку. Если SDS препятствует течению приложений, бычий сывороточный альбумин (BSA) может быть использован для предотвращения прилипания. Регулярное использование SDS или BSA, кажется, не имеют очевидной разницы. Добавить 50 мкл 2x белка загрузки красителя (4% SDS, 10% 2-меркаптоэтанола ислед бромфенол синего в 30% глицерина (вес / объем)) в 1,5 мл микроцентрифужную пробирку. У Дьюара с жидким азотом готовы.
  4. Время действия после удаления червей от гипоксии и записи. Снимите крышку с гипоксической камере, возьмите один образец пластины, и запечатать камеру. Использование дистиллированной воды, чтобы вымыть червей на нейлоновый фильтр, а затем вылейте в 15 мл коническую трубку. Вращайте червей вниз в настольном центрифуге при 1500 мкг в течение 15-20 секунд с тормозом.
  5. Использование вакуума для удаления большей части супернатанта из трубки, в результате чего червь гранулы нетронутыми.
  6. Используя пипетку, переместите червь гранул в 50 мкл до 1,5 трубки микроцентрифужную мл. Уплотнение труб и погружают в жидкий азот.
  7. Повторяйте, пока не все образцы были выделены. Выполните следующие процедуры для дома воздух контрольных образцов на соответствие. Образцы могут храниться при температуре -20 ° C.

6. Представитель Результаты

Организменном последствия гипоксии можно увидетьпутем изучения жизнеспособности во взрослую жизнь С. Элеганс (рис. 2). Эмбрионы заложены дикого типа Бристоль (N2) и HIF-1 (ia04) удаление всех мутантов выживают в доме воздухе концентрации O 2 (210 000 частей на миллион O 2). N 2 черви способны адаптироваться и выжить во взрослую жизнь в 5000 частей на миллион O 2, в то время как HIF-1 эмбрионы нежизнеспособны. Это показывает, что HIF-1 имеет важное значение для адаптации к изменению уровня кислорода, доступного в среде 10. Ни N2 ни HIF-1 животные могут выжить экспозиции до 1000 частей на миллион O 2.

Визуализация червя непосредственно в условиях гипоксии возможна с использованием рассечения масштаб и ясно контейнер (рис. 3). Непосредственно размещение гипоксии камеры на вскрытии рамки, нет необходимости удалять червей от гипоксии наблюдать организменном реакций. В комплект может быть оснащен флуоресценции illumation (как на рисунке 3

figure-protocol-1
Рисунок 1. Пример Гипоксия камеры. Направление потока газа обозначено стрелками. Газ хранится в сжатом газе танки с определенной концентрации O 2 (1) и двухступенчатый регулятор прилагается (2). Газ поступает в нижнюю часть трубки потока (3), выход на верхний правильный расход. Газ поступает затем в колбу пузырь (4), увлажняющие газа (обеспечения правильного подключения пузырь колбу, наблюдая за пузырями). Гидратированный газа, то переходит в камере гипоксии при впадении клапана (5), подвергая образцы к гипоксии. Газ, наконец, отверстия в помещение через выхлопные отверстия в камере.

figure-protocol-2
Рисунок 2. Жизнеспособность эмбрионов подвергается до 1000 частей на миллион O 2, 5000 частей на миллион O 2). Эмбрионы подвергались каждый кислорода условиях эмбрионы в течение 24 часов в непрерывном потоке кислорода камеры. Черви были перемещены в гипоксическим условиям, позволили разработать для взрослых в течение 48 часов, а затем забил за жизнеспособность во взрослую жизнь. п> 50, N = 5.

figure-protocol-3
Рисунок 3. Визуализация C. Элеганс в условиях гипоксии с микроскопом. Черви подвергаются гипоксии использование методов, описанных. Прозрачная экологической палаты (построен с блюдом пирекса кристаллизации и стеклянной пластины) находится непосредственно на стадии вскрытия области. Два мнения показал, один в том числе весь поток газа созданы, другие только с камерой на предметный столик микроскопа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот метод представляет собой стратегию построения гипоксическая среда, которая позволяет для сред с точной концентрацией кислорода, который ведется в лаборатории. Эти камеры обеспечивают простой метод для раскрытия организмов к конкретным низкой концентрации O 2 и мониторинга молекулярные и физиологические результаты. Экологические камеры описана собрана в лаборатории, а не промышленно и могут быть изменены таким образом, чтобы соответствовать потребностям эксперимента.

Одно неос...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим членов Миллер лаборатории для обсуждения и критического чтения рукописи. Эта работа была поддержана новая награда исследователя из Центра Натан Шок передового опыта в области фундаментальной биологии старения в DLM и Национального института здоровья награду R00 AG030550 к DLM.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер по каталогу
Трубы (FEP и PTFE) Коул Parmer
Tygon 		YO-95821-00 (1/8 "FEP)
06605-27 (1/16 х 1/8 "PTFE)" R-3603
Компрессионные фитинги Сиэтл Fluid Systems 06363-58 (М. муфта 1/16 ")
06363-62 (Ф. муфта 1/16 ")
06363-60 (М. муфта 1/8 ")
06363-61 (Ф. муфта 1/8 ")
Поток трубы Ольборг PMR3-010 073 (3 выхода)
PMR1-013520 (1 выход)
Контроллера массового расхода Сьерра-инструменты 810S-L-DR-2-О.В.1-SK1-V1-S1 (Mass Trak)
C100L-ДД-2-О.В.1-SV1-PV2-V1-SO-C10 (Smart Trak 2)
Сжатый газ бак Airgas Сделанный на заказ
Пластиковые мужчины Luer для арматуры штуцером для шланга Коул Parmer 45505-41 (серии 500, 1/16 ")
Литой акриловый коробки Ellard приборостроения Сделано на заказ
Трубопроводная арматура (латунь или нержавеющая сталь) Сиэтл Fluid Systems B-402-1 (1/4 "гайка)
B-200-3 (1/8 "Союз тройник)
B-400-набор (1/4 "наконечники)
B-QM2-B1-200 (QM Тело КК)
B-200-1-2 (1/8 х 1/8 "мужской сопп)
Dow Corning Вакуумная смазка Sigma-Aldrich Z273554
AnaeroPack окне Misubishi газа Chemical Company R684004 (0,4 л)
R685025 (2,5 л)
R685070 (7,0 л)
Pyrex газа мыть бутылки Sigma-Aldrich CLS31770500C (500 мл)
CLS31770250C (250 мл)
CLS31770125C (125 мл)
Пальмитиновая кислота Sigma-Aldrich P0500
Антимышиного IgG с пероксидазой хрена Южно биотехнологии Associates 1032-05
SuperSignal Запад Pico Chemiluminsecent основания Пирс Химическая 34077
100 х 50 блюд кристаллизации стекла Kimax Кимбл 23000

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Danovaro, R. The first metazoa living in permanently anoxic conditions. BMC Biology. 8, 30(2010).
  2. Birner, P. Overexpression of Hypoxia-inducible Factor 1 alpha Is a Marker for an Unfavorable Prognosis in Early-Stage Invasive Cervical Cancer. Cancer Research. 60, 4693-4696 (2000).
  3. Harris, A. L. Hypoxia - a key regulatory factor in tumour growth. Nat. Rev. Cancer. 2, 38-47 (2002).
  4. Ramirez-Bergeron, D. L. Hypoxia affects mesoderm and enhances hemangioblast specification during early development. Development. 131, 4623-4634 (2004).
  5. Staff, F. E. Wheel-well Stowaways Risk Lethal Levels of Hypoxia and Hypothermia. Human Factors and Aviation. 44, 1-5 (1997).
  6. Shen, C., Powell-Coffman, J. A. Genetic Analysis of Hypoxia Signaling and Response in C. elegans. Annals of the New York Academy of Sciences. 995, 191-199 (2003).
  7. Shen, C., Nettleton, D., Jiang, M., Kim, S. K., Powell-Coffman, J. A. Roles of the HIF-1 Hypoxia-inducible Factor during Hypoxia Response in Caenorhabditis elegans. Journal of Biological Chemistry. 280, 20580-20588 (2005).
  8. Wang, G. L., Jiang, B. H., Rue, E. A., Semenza, G. L. Hypoxia-inducible factor 1 is a basic-helix-loop-helix-PAS heterodimer regulated by cellular O2 tension. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92, 5510-5514 (1995).
  9. Epstein, A. C. R. C. elegans EGL-9 and Mammalian Homologs Define a Family of Dioxygenases that Regulate HIF by Prolyl Hydroxylation. Cell. 107, 43-54 (2001).
  10. Nystul, T. G., Goldmark, J. P., Padilla, P. A., Roth, M. B. Suspended Animation in C. elegans Requires the Spindle Checkpoint. Science. 302, 1038-1041 (2003).
  11. Gray, J. M. Oxygen sensation and social feeding mediated by a C. elegans guanylate cyclase homologue. Nature. 430, 317-322 (2004).
  12. Miller, D. L., Roth, M. B. C. Elegans Are Protected from Lethal Hypoxia by an Embryonic Diapause. Current Biology. 19, 1233-1237 (2009).
  13. Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C. M., Roth, M. B. Dephosphorylation of Cell Cycle-regulated Proteins Correlates with Anoxia-induced Suspended Animation in Caenorhabditis elegans. Molecular Biology of the Cell. 13, 1473-1483 (2002).
  14. Hu, C. -J., Wang, L. -Y., Chodosh, L. A., Keith, B., Simon, M. C. Differential Roles of Hypoxia-Inducible Factor 1{alpha} (HIF-1{alpha}) and HIF-2{alpha} in Hypoxic Gene Regulation. Molecular and Cellular Biology. 23, 9361-9374 (2003).
  15. Treinin, M. HIF-1 is required for heat acclimation in the nematode Caenorhabditis elegans. Physiological Genomics. 14, 17-24 (2003).
  16. Miller, D. L., Roth, M. B. Hydrogen sulfide increases thermotolerance and lifespan in Caenorhabditis elegans. PNAS. 104, 20618-20622 (2007).
  17. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
  18. Massie, M. R., Lapoczka, E. M., Boggs, K. D., Stine, K. E., White, G. E. Exposure to the metabolic inhibitor sodium azide induces stress protein expression and thermotolerance in the nematode Caenorhabditis elegans. Cell Stress Chaperones. 8, 1-7 (2003).
  19. Salceda, S., Caro, J. Hypoxia-inducible Factor 1α (HIF-1α) Protein Is Rapidly Degraded by the Ubiquitin-Proteasome System under Normoxic Conditions. Journal of Biological Chemistry. 272, 22642-22647 (1997).
  20. Theilacker, J. C., White, M. J. Diffusion of Gases in Air and Its Affect on Oxygen Deficiency Hazard Abatement. AIP Conference Proceedings. 823, 305-312 (2006).
  21. Chua, B., Kao, R. L., Rannels, D. E., Morgan, H. E. Inhibition of protein degradation by anoxia and ischemia in perfused rat hearts. Journal of Biological Chemistry. 254, 6617-6623 (1979).
  22. Probst, G., Riedinger, H. Jr, Martin, P., Engelcke, M., Probst, H. Fast Control of DNA Replication in Response to Hypoxia and to Inhibited Protein Synthesis in CCRF-CEM and HeLa Cells. Biological Chemistry. 380, 1371-1382 (1999).
  23. Semenza, G. L., Sen, C. K. Oxygen Sensing. 381, Academic Press. (2004).
  24. Chan, K., Roth, M. B. Anoxia-Induced Suspended Animation in Budding Yeast as an Experimental Paradigm for Studying Oxygen-Regulated Gene Expression. Eukaryotic Cell. 7, 1795-1808 (2008).
  25. Nystul, T. G., Roth, M. B. Carbon monoxide-induced suspended animation protects against hypoxic damage in Caenorhabditis elegans. PNAS. 101, 9133-9136 (2004).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи