Мы демонстрируем протокол, в котором администрация генотоксического azoxymethane агента (ОСО), а затем трех циклов провоспалительных агентов декстран сульфат натрия (DSS) быстро и последовательно создает опухолей толстой кишки у мышей с морфологической и молекулярно сходство тем, которые наблюдаются в человеческом колит -связанных рака.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Моделирование колит, связанного с раком Azoxymethane (ОСО) и декстран сульфат натрия (DSS)
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Лица с воспалительными заболеваниями кишечника (IBD), такие как болезнь Крона (БК) или неспецифический язвенный колит (UC), подвергаются повышенному риску развития колоректального рака (КРР) над здоровых людей. Этот риск пропорционально длительности и степени заболевания, с кумулятивная частота достигает 30% у лиц с давних UC с широко распространенным толстой участие 1. Кишечное дисплазии в IBD и колит, связанный рака (CAC), как полагают, развиваются в результате повторяющихся циклов повреждения эпителия и восстановление клеток в то время как эти клетки купались в хронический воспалительный цитокин среды. 2 Во время спонтанной и колит связанных рака поделиться качество бытия аденокарциномы, последовательности, лежащие в основе молекулярных событий, как полагают быть разными. 3 Это Различие утверждает, потребность в конкретных моделях животных CAC.
Несколько моделей мышей существуют в настоящее время для изучения CAC. Декстрансульфат Содимкм (DSS), агент с прямым токсическим действием на эпителий толстой, можно вводить в питьевой воде мышей в несколько циклов, чтобы создать хронические воспалительные состояния. При достаточной продолжительности, некоторые из этих мышей будет развиваться опухоль. 4 Опухоль развития поспешили в этой модели, если вводить в про-канцерогенные настройки. Они включают в себя мышей с генетическими мутациями в онкогенезе путей (APC, p53, Msh2), а также мышей, предварительно обработанных генотоксического агентов (azoxymethane [AOM], 1,2-диметилгидразин [DMH]) 5.
Сочетание DSS с острым средним отитом в качестве модели для рака колит, связанный завоевала популярность своей воспроизводимости, потенции, низкой ценой и простотой использования. Хотя они имеют общий механизм, ОСО было установлено, что более мощные и стабильные в растворе, чем DMH. В то время как развитие опухоли в других моделях обычно требуется несколько месяцев, мышей, которым вводили с острым средним отитом и затем обрабатывали DSS разработки адекватных опухолей6 сек всего 7-10 недель., 7 Наконец, ОСО и DSS могут быть введены мышам любого генетического фона (выбить, трансгенные и т.д.) без скрещивания на конкретный штамм онкогенного. Здесь мы покажем, протокол воспаление управляемых толстой опухолей у мышей с использованием одной инъекции острого среднего отита следуют три семидневного цикла DSS в течение 10 недель. Эта модель вызывает опухоли с гистологическим и молекулярные изменения, напоминающий те, которые происходят в человеческом CAC и обеспечивает очень ценной моделью для изучения онкогенеза и химиопрофилактики при этом заболевании 8.
Протокол
1. Колит, связанный индукции рака
- Отложите в сторону клетки от пола и возраста из 6-8 недельных мышах, которые будут использоваться для экспериментальной и контрольной групп. Мыши могут быть снабжены индивидуальными этикетками с маркировкой хвост или ухо клипов.
- В день 0, вес записи базовой и придать каждой мыши внутрибрюшинно (IP) с 10 мг / кг ОСО рабочего раствора (1 мг / мл в изотонический солевой раствор, разбавляют от 10 мг / мл маточного раствора в dH2O храниться при температуре -20 ° С) . Опираясь на опыт, эта доза может регулироваться в пределах 7-14 мг / кг и / или повторяющиеся в начале эксперимента.
<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Лечение мышей с острым средним отитом и DSS быстро и эффективно моделей человеческого колит связанных рака. Гипотезы о наследственных факторов, способствующих колит связанных рака может быть легко изучена с генетически модифицированным мышам. 13, 16 Кроме того, влияние фармакологических целей в колиты связанных рака можно изучать, используя мышей дикого типа.
Хотя эта модель высоко ценится, кто заинтересован в изучении развития опухоли толстой кишки в условиях воспаления, ограниче.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была частично финансируется за счет DK089016 и L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) и P30-DK52574 (в пищеварительной Вашингтонского университета Основные исследования болезней). AIT был Медицинского института Говарда Хьюза медицинской подготовки научных кадров Fellow.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии |
| C57BL/6J мышей | Jackson Laboratory | 000664 | |
| Azoxymethane (ОСО) | Sigma Aldrich | A5486-100мг | Маточный раствор: разбавленный до 10 мг / мл в дистиллированной воде, чтобы хранить при -20 ° С, 0,5 - 1 мл аликвоты. Рабочий раствор: разбавленный акции до 1 мг / мл в изотоническом (0,9%) солевой |
| Декстран Сульфат натрия (DSS) | БТ консультирование | DB001 | MW 40 кДа (36-50 кДа препараты из других источников, являются приемлемыми; Та же участь должна быть использована для одного эксперимента) 6 |
| Coloviewminiendoscopic системы | Karl Storz | Множественный | См. Becker и соавт. Для подробного объяснения оборудование и установку 11. |
| ТЭС быстрого FilterMax 500 мл Бутылка-фильтр, 0,22 мкм PES | Midwest Научные | TP99500 | Любой стандартный фильтр культуре тканей приемлемой |
| Этиловый спирт 200 Доказательство ASC / USP | Фармако-AAPER (или другой) | 11ACS200 | Разбавить до 70% в дистиллированной воде |
| Isoflurane, USP | Батлер Animal Health питания | 4029405 | Место мышь в стеклянную банку марлей или небольшой тканью, смоченной в анестетика |
| 18G прямой зонд иглы | Braintree Научные | N-008 | |
| Фосфатным буферным раствором (PBS) | СигмаAldrich | P5493 | Развести до 1X (0,01 М) в дистиллированной воде |
| Холодная лоток (Tissue Tek II холодной плиты) | Fisher Scientific | NC9491941 | Хранить при -20 ° C |
| ImageJ программного обеспечения | NIH (бесплатная загрузка) | http://rsbweb.nih.gov/ij/ | |
| Формальдегид (37%) | Fisher Scientific | F79-500 | Разбавить до 10% в PBS |
| BD Bacto Агар | Fisher Scientific | DF0140-01-0 | Используйте плиту для создания 2% раствор в дистиллированной воде |
| Miltex пинцет глаз Туалетный | MedPlus Инк | 18-780 | |
| Ножницы Miltex глаз | MedPlus Инк | 18-1430 | изогнутые предотвращения повреждения толстой кишки во время открытия. |
| Alcian синий 8GX (порошок) | Sigma Aldrich | A5268 | Добавить 1 г порошка на 100 мл 3%-ной уксусной кислоты (3 мл ледяной уксусной кислоты + 97 мл дистиллированной воды) |
| 1 мл туберкулина шприц с прикрепленными 26 G х 3/8 в внутрикожные иглы конические | BD | 305946 | Для инъекций AOM |
Ссылки
- Ekbom, A. Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study. N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).
- Terzic, J. Inflammation and colon cancer. Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).
- Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
