Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Ортотопическая малого трансплантации кишечника у крыс

14.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/4102

⸱

6 ноября 2012 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Bonn, Germany, 2Department of Surgery, Kyoto University Hospital

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Малый трансплантации кишечника стало общепринятым вариантом лечения для пациентов с необратимыми кишечной недостаточности. Наши экспериментальные модели ортотопической небольшой трансплантации кишечника у крыс служит надежным инструментом для решения основных иммунологических и воспалительных процессов, которые усложняют кишечного трансплантации.

Аннотация

Малый трансплантации кишечника стало общепринятым клиническим вариантом для пациентов с синдромом короткой кишки и недостаточности парентерального питания (необратимое кишечной недостаточности). В специализированных центрах улучшить оперативное управление и стратегии привели к отличным кратко-и среднесрочной пациентов и выживаемость трансплантата, обеспечивая при этом высокое качество жизни 1,3. В отличие от более распространенных трансплантации других солидных органов (например, сердца, печени), многие основные механизмы функция трансплантата и иммунологические изменения индуцированные кишечные трансплантации не совсем известно 6,7. Случаи острого отторжения, сепсис и хронической сердечной недостаточности трансплантата являются основными препятствиями по-прежнему способствует менее благоприятных долгосрочных результатов и препятствует более широкому занятости процедуру, несмотря на растущее число пациентов на дому парентерального питания тех, кто может извлечь выгоду из такой пересадки. В тонком кишечнике содержитсяБольшое количество пассажирских лейкоцитов обычно упоминается как часть кишечника лимфоидной системы (GALT) это является частью причиной высокой иммуногенности кишечного трансплантата. Наличие и близость многих комменсалы и патогенных микроорганизмов в кишечнике объясняется тяжести сепсиса эпизоды раз трансплантата слизистой целостность находится под угрозой (например, путем отказа). Для продвижения области кишечные и полиорганной трансплантации больше данных, полученных из надежных и возможные модели на животных необходимы. Модель предоставлена ​​здесь сочетает в себе надежность и технико-экономическое когда она будет создана в стандартной форме и могут предоставить ценную информацию в базовой сложные молекулярные, клеточные и функциональные механизмы, которые вызваны кишечной трансплантации. Мы успешно использовали и уточнена процедура описана более чем на 5 лет в нашей лаборатории 8-11. Юпитер видео-формат особенно полезен для демонстрации комплексных процедурДюре и избежать ловушек для начальной группы планируют создать ортотопической грызунов исследования кишечного трансплантации.

Протокол

1. Донор операции

  1. Донор крысы должны быть поста в течение 24 ч (свободный доступ к воде / растворе глюкозы).
  2. Для индукции анестезии Isoflurane ингаляции, начните с 2% на стандартные форсунки, а затем уменьшить до 1% после выполнения лапаротомии. Выполните ноги щепотку, чтобы проверить седативный эффект.
  3. Бритье живот и очистить кожу Подготовка 3 раза (Kodan). Затем выполните средний разрез после подкожного введения анальгетиков.
  4. После прививки, завернутый в солевом растворе пропитанной марли, отделить физиологические спайки между поджелудочной железой и восходящей ободочной кишки осторожно Q-наконечник (под операционным микроскопом с 6-кратным увеличением).
  5. Лигируют и разделить илеоцекального и права и среднего колики судов, использующих 7-0 шелка. После восходящей ободочной кишки распространено на правой стороне верхней брыжеечной вены (SMV), илеоцекальной, правой и средней суда колики могут быть определены для перевязки и разделения использованием 7-0 связей.
  6. Втяните живот вверх, так что весь SMV, расправляют, а подвергается. Использование комаров зажим для отвода. Зажим проводится пластилин масса формируется в форму по мере необходимости.
  7. Лигируют и разделить pancreatico-перстной вены Исходя из SMV. Все мелкие pancreatico-перстной вены, происходящих из SMV должны быть тщательно определены, лигировали с 7-0 шелка и разделен перед ткани поджелудочной железы может быть удалена из трансплантата.
  8. Лигируют и разделить потерять соединительной ткани, в том числе все лимфатические между SMV и брюшной аорты. С трансплантата все еще на правой стороне живота, теряют соединительной ткани, в том числе все лимфатические между SMV и брюшной аорты является доступным. Эта соединительная ткань должна быть лигировали использованием 7-0 шелка и разделить, чтобы избежать послеоперационных лимфореи из желудочно-кишечного трансплантата.
  9. Лигируют и разделить правой почечной артерии. После того, как соединительная ткань делится, правой почечной артерии становится accessiblе и лигируют и разделил 7-0 использованием шелка.
  10. Системно heparinise крысы с использованием 200 единиц гепарина IV через вену полового члена.
  11. Лигируют предельной артерий, и разделить тонкой кишки при дуодено-соединения и тощей кишки в подвздошной кишки.
  12. Аорты лигируют проксимальнее происхождения SMA. Воротной вены перерезана в месте слияния с селезеночной вены. Затем трансплантат собирают с сосудистой ножке, состоящей из SMA с аорты сегменте.

2. Процедура Backtable

  1. Заливать трансплантата с использованием 3 мл Университета Висконсина решение (UW) при 4 ° С через аортальный трубопровода и орошения просвете кишечника от тощей кишки конца 30 мл Уро-Nebacetin решение N при 4 ° С (люмен орошения является обязательным) .

Сразу же после извлечения протеза, аорты трубопровод используется для перфузии с 3 мл охлажденной решение UW. Для этого 20 G IV катетер на10 мл шприц используется. Перфузат должны быть соблюдены, чтобы свободно вытекать из разделили воротной вены. Для кишечные орошения с Nebacetin, 50 мл шприц используется.

  1. Хранить трансплантата в решении UW при 4 ° C в ходе подготовки получателя.

3. Получатель операции

  1. Получатель крысы должны быть поститься в течение 24 ч (свободный доступ к воде / растворе глюкозы).
  2. Для индукции анестезии Isoflurane ингаляции, начните с 2% на стандартные форсунки, а затем уменьшить до 1% после выполнения лапаротомии. Выполните ноги щепотку, чтобы проверить седативный эффект.
  3. Бритье живот и очистить кожу Подготовка 3 раза (Kodan). Затем выполните средний разрез после подкожного введения Carprofen 5 мг / кг подкожно для интраоперационного обезболивания.
  4. Оберните получателя кишечника в нормальном физиологическом растворе пропитанной марли и положите его на грудь получателя.
  5. Откройте забрюшинного пространства прямо с Q-подсказки, и подвергать брюшнойвнутренней аорты и нижней полой вены чуть ниже почечных сосудов до уровня подвздошных сосудов, в случае необходимости также использовать microscissors. Лигируют небольшой поясничный и спинной tribuaries от аорты и полой вены 7-0 использованием шелка, чтобы избежать потери крови. (Для этого, изменения масштаба хирургического микроскопа 16x).
  6. Крест-зажим аорты и нижней полой вены ниже левой почечных сосудов проксимальнее и выше подвздошной бифуркации дистально использованием микрососудов клипов. Только один зажим используется проксимально, так и дистально зажать оба судна одновременно. Надрезать оба судна вперед использованием microknife и промыть оставшиеся крови.
  7. Создание конца в сторону анастомоза между трансплантатом сегмента аорты и инфраренальной аорты получателя с использованием непрерывного 10-0 Prolene шва .. Первоначально трансплантат находится на правой стороне живота (глава крысы расположен в 12 часов) для выполнения стежков назад стенке артериальных анастомозов и связывая нижней пребывания шва. Thан, трансплантат переданы в левой части живота (глава крысы расположены в 9 часов) для выявления и ушивания передней стенки анастомоза.
  8. Конец-в-бок анастомоза между трансплантатом воротной вены и нижней полой вены реципиента осуществляется также путем запуска швов использованием 10-0 Prolene. С крыса все еще лежала боком (голова в 9 часов), трансплантат расположены на левой стороне живота и нижней пребывания шва находится. Анастомоза начал с задней стенки изнутри судна. После того, как нижняя пребывания шва связано, передние стежки стены могут быть выполнены из вне.
  9. Снимите зажимы дистальных первой, а затем верхний зажимы. Любое кровотечение анастомоза находится под контролем прямого давления с помощью Q-Tips. Трансплантат должен быть проверен на равный и быстрый реперфузии.
  10. Резекции тонкой кишки всей получателя после перевязки сосудов брыжейки. Получатели пройти промежуточные итоги резекция тонкой кишки, сохранение 2-3 см проximal тощей кишки и 1 см дистального отдела подвздошной кишки.
  11. Восстановление кишечной непрерывности проксимальных (еюно-эюностомия) и дистальных (подвздошно-илеостомия) из конца в конец кишечного анастомоза использованием прервал один слой шва с 6-0 Monocryl. Около 16 швов, необходимых для завершения анастомоза.
  12. Промывать в брюшную полость с физиологическим раствором до полной очистки. Администрирование 2 мл физиологического раствора внутрибрюшинно для замены жидкости. Затем закройте живот с помощью непрерывного шва с 3-0 Викрил для мышечного слоя плюс непрерывного шва кожи.
  13. В послеоперационном периоде у крыс должна быть поста (с доступом к воде и раствора глюкозы) в течение еще 24 ч, затем перезапущен на стандартных крыс корма и воды вволю. Обезболивание с карпрофена следует вводить в течение 3 дней (см. дозировку ниже).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Нормальное течение послеоперационного периода

Пересаженных животные должны быстро восстановиться от процедуры, предусмотренной тепла лампы в течение примерно 1 часа. Гипотермия является одной из основных причин послеоперационной летальности и должны быть тщательно избегал внутри-и послеоперационном периоде. Потери Интраоперационная жидкость должна быть заменена подкожная инъекция 2,5 мл физиологического раствора плюс 2,5 мл Глюкоза 5% каждые 8 ​​ч в течение первых 24 часов. Крысы также должны и...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В то время как кишечная модели трансплантации у крыс были описаны еще в 1970-е годы 5 наиболее недавно занятых модели включают гетеротопической кишечного трансплантации с использованием различных методов 13. В то время как гетеротопической процедур в целом имеют то преимущество, легче микрохирургической техники и легче доступность трансплантата для оценки, кишечные гетеротопической трансплантации имеет большой недостаток, не принимая во внимание многочисленные взаимодействия пересаженной тонкой киш...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер в каталоге Комментарии (по желанию)
Висконсинского университета (UW) решение (ViaSpan) Bristol-Myers Squibb
Уро-Nebacetin N решения Nycomed 6967855
Ампициллин Ratiopharm
Carprofen (Римадил) Pfizer
Prolene 10-0 unresorbable шва Ethicon
Monocryl 6-0 рассасывающийся шовный Ethicon
Викрил 3-0 рассасывающийся шовный Ethicon
внутривенного катетера G 20 1.1x33 мм Braun
внутривенного катетера G 22 0.9x25 мм Braun
Kodan кожи Prep Schülke
NaCl 0,9% инфузионных растворов Braun
Изогнутый пинцет малый FineScienceTools 11009-13
Micro щипцы изогнутые AESCULAP BD 333
Micro щипцы изогнутые AESCULAP FD281R
Micro щипцы прямой 1 WPI 5
Micro щипцы прямой 2 WPI 2
Микро-иглодержатель WPI 14081
Микро-ножницы FineScienceTools 15006-09
Micro скальпеля МАНИ Офтальмологическая ножом
Micro зажимы AESCULAP FB329R

Ссылки

  1. Abu-Elmagd, K. M., et al. Five Hundred Intestinal and Multivisceral Transplantations at a Single Center: Major Advances With New Challenges. Ann. Surg. 250 (4), 567-56 (2009).
  2. Berney, T., et al. Portal versus systemic drainage of small bowel allografts: comparative assessment of survival, function, rejection, and bacterial translocation. J. Am. Coll. Surg. 195 (6), 804(2002).
  3. Fishbein, T. M. Intestinal transplantation. N. Engl. J. Med. 361 (10), 998(2009).
  4. Hernandez, F., et al. Is portal venous outflow better than systemic venous outflow in small bowel transplantation? Experimental study in syngeneic rats. J. Pediatr. Surg. 40 (2), 336(2005).
  5. Monchik, G. J., Russell, P. S. Transplantation of small bowel in the rat: technical and immunological considerations. Surgery. 70 (5), 693(1971).
  6. Murase, N., et al. Graft-versus-host disease after brown Norway-to-Lewis and Lewis-to-Brown Norway rat intestinal transplantation under FK506. Transplantation. 55 (1), 1(1993).
  7. Murase, N., et al. Immunomodulation of intestinal transplant with allograft irradiation and simultaneous donor bone marrow infusion. Transplant Proc. 31 (1-2), 565(1999).
  8. Pech, T., et al. Perioperative infliximab application ameliorates acute rejection associated inflammation after intestinal transplantation. Am. J. Transplant. 10 (11), 2431(2010).
  9. Schaefer, N., et al. Resident macrophages are involved in intestinal transplantation-associated inflammation and motoric dysfunction of the graft muscularis. Am J Transplant. 7 (5), 1062(2007).
  10. Schaefer, N., et al. Mechanism and impact of organ harvesting and ischemia-reperfusion injury within the graft muscularis in rat small bowel transplantation. Transplant. Proc. 38 (6), 1821(2006).
  11. Schaefer, N., et al. Acute rejection and the muscularis propria after intestinal transplantation: the alloresponse, inflammation, and smooth muscle function. Transplantation. 85 (10), 1465(2008).
  12. Xue, L., et al. Surgical experience of refined 3-cuff technique for orthotopic small-bowel transplantation in rat: a report of 270 cases. Am. J. Surg. 198 (1), 110(2009).
  13. Zhang, X. Q., et al. Simplified techniques in rat heterotopic small bowel transplantation. Transplant. Proc. 38 (6), 1840(2006).
  14. Zhao, Y., et al. The establishment of a new en bloc combined liver-small bowel transplantation model in rats. Transplant. Proc. 39 (1), 278(2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Ортотопическая малого трансплантации кишечника у крыс
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.