Эрратум: Реагрегация культур тимуса

Краткое содержание

Было внесено исправление в статью: Reaggregate Thymus Cultures. В связи с ошибкой издателя была повторно опубликована пересмотренная аннотация.

Аннотация

Была внесена правка в статью: Реагрегация культур тимуса. В связи с ошибкой издателя была переопубликована исправленная версия аннотации. Текст аннотации был исправлен следующим образом:

Стромальные клетки в лимфоидных тканях организованы в трехмерные структуры, которые создают каркас, предположительно контролирующий миграцию и развитие гемопоэтических клеток. Важно отметить, что поддержание этой трехмерной организации, по-видимому, имеет решающее значение для нормального функционирования стромальных клеток, в то время как двухмерные монослойные культуры зачастую способны поддерживать лишь отдельные фрагменты функций лимфоидной ткани. В тимусе сложные сети кортикальных и медуллярных эпителиальных клеток служат каркасом, который регулирует рекрутирование, пролиферацию, дифференцировку и выживание лимфоидных предшественников в процессе многоэтапного внутритимусного развития Т-клеток. Понимание функциональной роли отдельных стромальных компартментов в тимусе необходимо для определения того, как тимус обеспечивает распознавание «своего» и «чужого». В данной работе мы описываем метод, в котором используется пластичность фетальных тканей для их повторного объединения в целостные трехмерные структуры in vitro после ферментативной диссоциации. Диссоциация долек фетального тимуса в гетерогенные клеточные смеси с последующим разделением на отдельные клеточные компоненты сочетается с in vitro реассоциацией выбранных типов клеток в трехмерные реагрегатные структуры в заданных соотношениях, что позволяет исследовать определенные аспекты развития Т-клеток при заданных клеточных условиях. (Эта статья основана на работе, впервые опубликованной в Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, страницы 185-196).

из

В тимусе незрелые CD4+8+ тимоциты, экспрессирующие случайно перестроенные гены α- и β-цепей Т-клеточного рецептора, проходят этапы положительной и отрицательной селекции в зависимости от их способности распознавать молекулы собственного пептида/главного комплекса гистосовместимости (MHC), экспрессируемые стромальными клетками тимуса. Анализ роли стромальных клеток тимуса при внутритимусной селекции in vivo затруднен из-за клеточной сложности микроокружения тимуса взрослого организма в стационарном состоянии, а также из-за отсутствия подходящих стратегий таргетинга для манипулирования экспрессией генов в конкретных компартментах стромы тимуса. Мы показали, что микроокружением тимуса можно легко манипулировать in vitro с помощью культур реагрегатов органа тимуса, которые позволяют создавать трехмерные доли тимуса из определенных стромальных и лимфоидных клеток. Хотя другие системы in vitro поддерживают некоторые аспекты развития Т-клеток, культура реагрегатов органа тимуса остается единственной системой in vitro, способной поддерживать эффективные события селекции тимоцитов, опосредованные MHC I и II классов, и, таким образом, может быть использована в качестве эффективного инструмента для изучения клеточной и молекулярной регуляции положительной и отрицательной селекции в тимусе.

Протокол

В статью Reaggregate Thymus Cultures была внесена правка. Из-за ошибки издателя была переопубликована исправленная аннотация. Аннотация была исправлена следующим образом:

Стромальные клетки лимфоидных тканей организованы в трехмерные структуры, которые создают каркас, предположительно контролирующий миграцию и развитие гемопоэтических клеток. Важно отметить, что сохранение этой трехмерной организации, по-видимому, имеет решающее значение для нормального функционирования стромальных клеток, поскольку двухмерные монослойные культуры часто оказываются способны поддерживать лишь отдельные фрагменты функций лимфоидной ткани. В тимусе сложные сети кортикальных и медуллярных эпителиальных клеток служат основой, которая контролирует рекрутирование, пролиферацию, дифференцировку и выживаемость лимфоидных предшественников в процессе многоэтапного развития Т-клеток внутри тимуса. Понимание функциональной роли отдельных стромальных компартментов в тимусе необходимо для определения того, как тимус осуществляет дискриминацию «своего» и «чужого». Здесь мы описываем методику, в которой используется пластичность фетальных тканей для воссоздания целостных трехмерных структур in vitro после их ферментативной дезагрегации. Диссоциация долей фетального тимуса в гетерогенные смеси клеток с последующим разделением на отдельные клеточные компоненты сочетается с in vitro реассоциацией этих необходимых типов клеток в трехмерные реагрегатные структуры в заданных соотношениях, что дает возможность исследовать конкретные аспекты развития Т-клеток при определенных клеточных условиях. (Эта статья основана на работе, впервые опубликованной в Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, стр. 185-196).

из

В тимусе незрелые CD4+8+ тимоциты, экспрессирующие случайно перестроенные гены α- и β-цепей Т-клеточного рецептора, подвергаются процессам положительной и отрицательной селекции в зависимости от их способности распознавать молекулы собственного пептида/главного комплекса гистосовместимости (MHC), экспрессируемые стромальными клетками тимуса. Анализ роли стромальных клеток тимуса при внутритимусной селекции in vivo затруднен клеточной сложностью микроокружения тимуса у взрослых особей в стационарном состоянии, а также отсутствием подходящих стратегий таргетирования для манипулирования экспрессией генов в конкретных стромальных компартментах тимуса. Мы показали, что микроокружением тимуса можно легко манипулировать in vitro с помощью реагрегированных органных культур тимуса, которые позволяют подготавливать трехмерные доли тимуса из определенных стромальных и лимфоидных клеток. Хотя другие системы in vitro поддерживают некоторые аспекты развития Т-клеток, реагрегированная органная культура тимуса остается единственной системой in vitro, способной поддерживать эффективные процессы селекции тимоцитов, опосредованные MHC I и II классов, и, следовательно, может быть использована в качестве эффективного инструмента для изучения клеточной и молекулярной регуляции положительной и отрицательной селекции в тимусе.