Эрратум: Подготовка органных культур тимуса, обработанных 2-dGuo

Краткое содержание

Было внесено исправление в статью: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. В связи с ошибкой издателя была повторно опубликована пересмотренная аннотация.

Аннотация

Было внесено исправление в статью: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Из-за ошибки издателя была повторно опубликована пересмотренная аннотация. Исправленный текст аннотации:

Известно, что в тимусе взаимодействия между развивающимися предшественниками T-клеток и стромальными клетками, включая кортикальные и медуллярные эпителиальные клетки, играют ключевую роль в формировании функционально компетентного пула T-клеток. Однако сложность развития T-клеток в тимусе in vivo может ограничивать анализ отдельных клеточных компонентов и конкретных стадий развития. Системы культурального выращивания in vitro предоставляют легкодоступный способ изучения множества сложных клеточных процессов. Системы органной культуры тимуса представляют собой широко используемый подход к изучению внутритимусного развития T-клеток в определенных условиях in vitro. Здесь мы описываем систему, в которой из долей эмбрионального тимуса мыши можно удалить эндогенные гемопоэтические элементы путем предварительного культивирования органа с 2-дезоксигуанозином — соединением, селективно токсичным для гемопоэтических клеток. Данный метод не только обеспечивает легкодоступный источник стромальных клеток тимуса для исследования роли тимусного микроокружения в развитии и селекции T-клеток, но и служит основой для дальнейших экспериментальных подходов, включая восстановление алимфоидных долей тимуса in vitro с определенными гемопоэтическими элементами, трансплантацию алимфоидных тимусов реципиентным мышам и создание реагрегированных органных культур тимуса. (Эта статья основана на работе, впервые опубликованной в Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, стр. 185-196).

из

В тимусе незрелые CD4+8+ тимоциты, экспрессирующие случайно перестроенные гены α- и β-цепей T-клеточного рецептора, проходят процессы положительной и отрицательной селекции в зависимости от их способности распознавать молекулы собственного пептида и главного комплекса гистосовместимости (MHC), экспрессируемые стромальными клетками тимуса. Анализ роли стромальных клеток тимуса при внутритимусной селекции in vivo затруднен клеточной сложностью микроокружения в тимусе взрослого организма в стационарном состоянии, а также отсутствием подходящих стратегий таргетного воздействия для манипулирования экспрессией генов в конкретных стромальных компартментах тимуса. Мы показали, что микроокружением тимуса можно легко манипулировать in vitro с помощью органных культур реагрегатов тимуса, которые позволяют создавать трехмерные доли тимуса из определенных стромальных и лимфоидных клеток. Хотя другие системы in vitro поддерживают некоторые аспекты развития T-клеток, органная культура реагрегатов тимуса остается единственной системой in vitro, способной поддерживать эффективные процессы селекции тимоцитов, опосредованные MHC I и II классов, и поэтому может быть использована в качестве эффективного инструмента для изучения клеточной и молекулярной регуляции положительной и отрицательной селекции в тимусе.

Протокол

Было внесено исправление в статью: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Из-за ошибки издателя была переопубликована исправленная аннотация. Текст аннотации был исправлен следующим образом:

Известно, что в тимусе взаимодействия между развивающимися предшественниками T-клеток и стромальными клетками, включая кортикальные и медуллярные эпителиальные клетки, играют ключевую роль в формировании функционально компетентного пула T-клеток. Однако сложность развития T-клеток в тимусе in vivo может ограничивать анализ отдельных клеточных компонентов и конкретных стадий развития. Системы культуры in vitro обеспечивают легкодоступный способ изучения множества сложных клеточных процессов. Системы органокультуры тимуса представляют собой широко используемый подход для изучения внутритимусного развития T-клеток в определенных условиях in vitro. Здесь мы описываем систему, в которой доли эмбрионального тимуса мыши могут быть очищены от эндогенных гемопоэтических элементов путем предварительного культивирования органа в 2-дезоксигуанозине — соединении, обладающем селективной токсичностью по отношению к гемопоэтическим клеткам. Данный метод не только обеспечивает легкодоступный источник стромальных клеток тимуса для исследования роли тимусного микроокружения в развитии и селекции T-клеток, но и служит основой для дальнейших экспериментальных подходов, включая восстановление алимфоидных долей тимуса in vitro с использованием определенных гемопоэтических элементов, трансплантацию алимфоидных тимусов реципиентам-мышам и создание реагрегатных органокультур тимуса. (Данная статья основана на работе, впервые опубликованной в Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, стр. 185-196).

из

В тимусе незрелые CD4+8+ тимоциты, экспрессирующие случайным образом перестроенные гены α- и β-цепей Т-клеточного рецептора, подвергаются положительной и отрицательной селекции в зависимости от их способности распознавать молекулы собственного пептида/главного комплекса гистосовместимости (MHC), экспрессируемые стромальными клетками тимуса. Анализ роли стромальных клеток тимуса при интратимусной селекции in vivo затруднен клеточной сложностью микроокружения в состоянии гомеостаза у взрослого организма, а также отсутствием подходящих стратегий таргетинга для манипулирования экспрессией генов в конкретных компартментах стромы тимуса. Мы показали, что микроокружение тимуса можно легко моделировать in vitro с помощью культур реагрегатов органа тимуса, которые позволяют создавать трехмерные доли тимуса из определенных популяций стромальных и лимфоидных клеток. Хотя другие системы in vitro поддерживают некоторые аспекты развития Т-клеток, культура реагрегатов органа тимуса остается единственной системой in vitro, способной поддерживать эффективные события селекции тимоцитов, опосредованные MHC I и II классов, и поэтому может быть использована в качестве эффективного инструмента для изучения клеточной и молекулярной регуляции положительной и отрицательной селекции в тимусе.