Метод количественной оценки хемотаксического ответа Caenorhabditis Элеганс Описан. Хемотаксическими индекс (СИ) был использован как способ точно оценить реакцию червей определенные цели, а также служить в качестве платформы для сравнения между штаммами и соединений, представляющих интерес.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Многие организмы используют хемотаксисе искать источники пищи, избегать вредных веществ, а также найти партнеров. Caenorhabditis Элеганс имеет впечатляющие поведения хемотаксиса.
Помещение за тестирование реакции червей одоранта, чтобы разместить их в районе, и наблюдать за движением вызвало в ответ на одоранта. Даже с учетом многих доступных анализов, оптимизация червь местонахождение относительно контрольных и испытательных площадок, при сведении к минимуму взаимодействие червей друг с другом, при сохранении значительных размеров образец остается незавершенное 1-10. Описанный здесь метод направлен на решение этих вопросов, изменив анализа разработанных Баргман и соавт. 1. Чашку Петри разделена на четыре квадранта, два противоположных квадрантах с пометкой "Тест" и два обозначены "Контроль". Обезболивающий размещается во всех исследуемых и контрольных сайтов. Черви помещаются в центре пластины с Circlэлектронной отмечены вокруг начала координат, чтобы неподвижные черви будут игнорироваться. Используя четырехквадрантные система, а не один или два 2 +1 исключает предвзятость в движение червей, так как они находятся на одинаковом расстоянии от опытных и контрольных образцов, независимо от того, с какой стороны от происхождения они начали. Это обходит проблему червей вынуждена путешествовать через кластер других червей, чтобы ответить на одоранта, которые могут задержать червей или заставить их принять более кружным путем, что дает неверное толкование их намеченного пути. Этот метод также показывает практические преимущества, имеющие больший размер выборки и позволяет исследователю для запуска анализа без присмотра и забить червей раз за отведенное время истекло.
Введение
Уорд впервые разработана хемотаксиса в 1973 году 5, и с тех пор она имела далеко идущие приложений. Нейробиологии одно поле, что выиграл от использованием разнообразных хемотаксиса. Обонятельная адаптация, простой формы обучения и памяти, была продемонстрирована в C. Элеганс использованием хемотаксиса 6. Они также показано, что C. Элеганс этанола может развиваться толерантность результат, который не только демонстрирует поведенческую пластичность червей, но это также показывает, что черви могут быть очень полезны в изучении алкогольной зависимости у людей 3. Анализы даже были разработаны, чтобы продемонстрировать спо....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка / стиральная черви
- Синхронизация червей молодых взрослых 11.
- Пипетки 2 мл базальной S на 5 см Хемотаксис тарелку поставил червей, которые только что очистили газон OP50 Е. палочки. Наклоните пластины мере необходимости для обеспечения червей промывают с поверхности пластины в буфер.
- Внесите 1 мл червя-S базальной решение в микроцентрифужную трубки.
- Центрифуга в течение 10 сек использованием PicoFuge при 6600 оборотах в минуту.
- Аспирируйте базальной S, оставляя осадок червей нетронутыми.
- Добавьте 1 мл раствора базальной S в микроцентрифужных трубки, инвертировать несколько р....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Сравнение дикого типа (N2) С. Элеганс в УСО-10 (KY10) мутанта.
Мы использовали диацетил, известный C. Элеганс хемоаттрактант, сравнивать дикого типа червей, что и мутант, который не хватает рецепторов Диацетил 1,12. Для дикого типа (N2) червей хемотаксическими индекс 0,100 ± 0,066 в этаноле и 0,839 ± 0,031 до 0,5% диацетила. Как и ожидалось, диацетил вызывает значительное chemoattractive ответ от дикого типа червей (Р <0,003). В отличие УСО-.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хемотаксиса, хотя контролируется комплексом нейронов и клеточные механизмы, может быть легко и объективно количественно с помощью хемотаксиса. Для получения наилучших результатов анализов, некоторые важные шаги должны быть приняты. Во-первых, постановка червей имеет важное значение для получения последовательной экспериментальных результатов. Черви на разных этапах жизни ведут себя иначе, 13, так смешанных червей этапе может привести к искажению результатов эксперимента. Во-вторых, обеспечение всех E. пал.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим естественных наук и факультет искусств и наук в Королевском университете для финансирования этой работы. Кроме того, мы благодарим Чин-Санг лабораторию для предоставления необходимых реагентов, оборудования и технической поддержки. Мы также благодарим QGEM 2011 году, особенно Тони Он за его вклад в дискуссию.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| S Basal (- холестерин) [5,8 г NaCl; 1 М К фосфатный буфер, pH 6,0; dH2O до 1 литра.] Автоклав | |||
| PicoFuge | Stratagene | 400552 | |
| Микроскопы | Leica | ||
| Диссекционные | Leica | ||
| Пипетка P1000 | Gilson | ||
| Пипетка P10 | Gilson | ||
| 0,5 М Натрия азида | |||
| Хемотаксис агар [1,6% BBL-агар (Benton-Dickinson) или 2% Difco-агар. Автоклав. Добавить 5 мМ калия фосфат, pH 6,0; 1 мМ CaCl2, 1 мМ MgSO4] | |||
| Этанол/Дистиллированная вода | |||
| Тестовые соединения (например, 0,5% диацетил) | |||
| Агар | Bio-Rad | 166-0600 | |
| NH4Cl | Amresco | CA97062-046 | |
| MOPS | VWR | CA12001-120 | |
| NH4OH | BDH | CABDH8641-2 | |
| 0,25% Твин 20 | Bio-Rad | 170-6531 |
Ссылки
- Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell. 74, 515-527 (1993).
- Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
