Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Формирование человеческого эпителия простаты с использованием тканевых Рекомбинация грызунов мочеполовой Мезенхима Синус и стволовых клеток человека

13.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50327

⸱

22 июня 2013 г.

 ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Разгадать ранних молекулярных механизмов, лежащих в основе рака простаты посвящения, новые и инновационные модели человеческих систем и подходов крайне необходимы. Потенциал предварительного простаты мезенхимы урогенитального синуса (UGSM), чтобы побудить население плюрипотентных стволовых клеток для формирования человеческого эпителия простаты является мощным инструментом в экспериментальном исследовании простаты.

Аннотация

Прогресс в исследовании рака простаты строго ограничена наличием человеческого происхождения и гормонов наивные модели систем, которые ограничивают нашу способность понимать генетических и молекулярных событий, лежащих в основе заболевания простаты посвящения. К разработке более эффективных систем моделью для изучения человеческих простаты канцерогенеза, мы и другие воспользовались уникальной Pro-индуктивные простаты потенциал эмбриональных грызунов стромы простаты, называемая мезенхимы урогенитального синуса (UGSM). При рекомбинации с определенными плюрипотентных клеточных популяций, таких как эмбриональные стволовые клетки, UGSM индуцирует образование нормальной человеческой предстательной железы эпителия в тестостерон-зависимым образом. Такая система человека модель может быть использован для исследования и экспериментально проверить способность кандидата гены рака простаты восприимчивость ускоренными темпами по сравнению с типичными исследования трансгенных грызуна. Поскольку человеческие эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) могут быть генетически модифицированные культуры в Усинг индуцируемой экспрессии гена или миРНК нокдауна векторов до ткани рекомбинации, такая модель облегчает тестирование функциональных последствий генов или их комбинации генов, которые, как полагают, способствуют или предотвращения канцерогенеза.

Методика выделения чистых популяций UGSM клетки, однако, является сложной задачей и зачастую требует обучения кто-то с предыдущим опытом, чтобы лично учить. Кроме того, прививка клеточных смесей под почечную капсулу с ослабленным иммунитетом хозяина может быть технически сложным. Здесь мы опишем и проиллюстрируем соответствующего уровня изоляции UGSM из эмбрионов грызунов и почечной капсулы имплантации тканей смесями, чтобы сформировать человека эпителия простаты. Такой подход, на современном этапе, в естественных условиях требуется ксенотрансплантации эмбриональных стволовых клеток; будущих приложений потенциально может включать в пробирке образование железы или использование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток населения (ИПСК).

Введение

Существует огромная потребность в более человеческих систем модели рака простаты. В частности, соответствующие системы человека модели нормальным, доброкачественных простаты тканей, которые могут быть генетически манипулировать, чтобы непосредственно различить роль специфических генов в инициации рака предстательной железы, было бы невероятно информативным. Появление геномной эры выявила многочисленные гены, которые могут играть определенную роль в формировании рака. Отсутствие экспериментальных систем организма человека модели, однако, значительно ограничивает наши возможности функционального тестирования и характеризуют кандидата простаты генов предрасположенности ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями, содержащимися в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья. Протокол был одобрен Чикагского университета Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC, номера протоколов 72066 и 72231). Все операции проводили под наркозом, и все усилия были предприняты для уменьшения страданий. Эмбриональных стволовых клеток человека линии WA01 (H1; NIH-регистрации # 0043) был приобретен у WiCell (Мэдисон, Висконсин) и культивируют с использованием фидер-независимое протокола с использованием средств массовой информации mTeSR1 (Stem Cell Техноло....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Основываясь на отчете захватывающих Тейлор и др.., Наша лаборатория разработала прививку протокол, используя широко используется H1 (NIH назначенных WA01, генетически мужчины) человека линию эмбриональных стволовых клеток. 1 по этой статье были тщательно протестированы для контроля качества и является нормальной кариотипически 13 При культивировании надлежащим образом, ЭСК клетки могут быть сохранены, расширены и замораживали в недифференцированных плюрипотентных состоянии и использовании .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Ткань рекомбинации с использованием UGSM является чрезвычайно полезным методом исследовать развитие предстательной железы и молекулярных событий, ведущих к инициированию рака предстательной железы. Индуктивный потенциал UGSM была использована для многочисленных приложений в простате исследований, к ним относятся повышение опухоли предстательной железы принимают клеточных линиях и опухолях, изучая эпителиальные-стромальных взаимодействий и формирования межвидовых рекомбинантами простаты 7,17-20 надлежащей подг.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют никакого конфликта интересов с предоставленную работу.

Благодарности

Мы хотели бы выразить признательность за поддержку Секции урологии Чикагского университета во главе с доктором Арье Шалхавом и директором по урологическим исследованиям доктором Кэрри Ринкер-Шеффер. Мы также хотели бы выразить признательность за поддержку Комплексному онкологическому центру Чикагского университета (UCCCC) во главе с доктором Чикагским университетом. Мишель Ле Бо. Мы также благодарим экспертов за техническую помощь основного учреждения Ресурсного центра человеческих тканей под руководством доктора Марка Лингена и помощь Лесли Мартин и Мэри Джо Фекете. Мы также благодарим Центр иммуногистохимии под руководством Терри Ли. Эта работа финансировалась кафе....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хэнк s Сбалансированный солевой раствор (HBSS)GIBCO14170
DMEM/F12GIBCO11330
R1881Sigma965-93-5Смешать до 1 мкг/мл в этаноле (1,000x стоковый)
NEAAGIBCO11140
Pen-Strepping SolutionGIBCO15070100x стоковый
MatrigelBD Biosciences354230
КЕТАЗЕТ (кетамина гидрохлорид) Fort Dodge Animal HealthNDC 0856-2013-01100 мг/мл; развести 1:10 в стерильном физиологическом растворе
AnaSed (ксилазин) VET-A-MIX, Inc.NADA 139-23620 мг/мл; развести 1:10 в стерильном физиологическом растворе
TrypsinBD Biosciences215240
Collagenase SigmaC2014
Ketoprofen Fort DodgeNDC 0856-4396-01100 мг/мл; развести 1:1000 в стерильном физиологическом растворе
Altalube глазная мазь Altaire Pharmaceuticals, Inc.NLC 56641-19850
Leica MZ16 F СтереомикроскопLeicaМожно использовать любой хороший препарирующий эндоскоп.
Весенние ножницы VannasFine Science Tools15001-08
ШприцHamilton84855
Игла Hamilton, маленькая RN, 28 калибр, 0,5 дюйма, тип точки # 3 (тупой)Hamilton7803-02Индивидуальная игла
для подготовки этанолаFisher Scientific06-669-62
Стерильные марлевые салфеткиFisher Scientific22-415-469
Ethicon Vicryl Suture (4-0 FS-2)MedVet InternationalJ392HИгольчатый, растворимый шовный материал
Autoclip 9 мм Зажимы для ранBecton Dickenson427631
PVP Iodine Prep PadsFisher Scientific06-669-98
Диссекторальные ножницы с тупым концомFine Science Tools14072-10
Dumont щипцы с тонким наконечником Fine TipFine Science Tools11252-50
Иглодержатель с ножницамиFine Science Tools12002-14

Ссылки

  1. Taylor, R. A., et al. Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells. Nat. Methods. 3, 179-181 (2006).
  2. Cunha, G. R., Chung, L. W. Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in u....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Имплантация в почечную капсулуплюрипотентные стволовые клеткиэмбриональные стволовые клеткимодель ксенотрансплантатаэкспрессия ПСАандрогензависимостьизоляция клеток